【摘 要】
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目的:1、研究CBP基因敲低细胞系、CBP+/-敲除小鼠的集落形成及基因修复功能.2、研究CBP +/-基因敲除小鼠通过NHEJ修复途径修复DNA双链断裂功能.方法:1、通过Lenti-virus转染技术形成不同程度CBP基因敲低细胞(EML细胞细胞系)克隆,敲低比例分别从20％至80％,对上述细胞系进行集落形成试验(CFC array)及不同基因修复途径关键酶基因(Real-time PCR)及
【机 构】
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苏北人民医院,225001 Greehey Children's Cancer Research
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目的:1、研究CBP基因敲低细胞系、CBP+/-敲除小鼠的集落形成及基因修复功能.2、研究CBP +/-基因敲除小鼠通过NHEJ修复途径修复DNA双链断裂功能.方法:1、通过Lenti-virus转染技术形成不同程度CBP基因敲低细胞(EML细胞细胞系)克隆,敲低比例分别从20％至80％,对上述细胞系进行集落形成试验(CFC array)及不同基因修复途径关键酶基因(Real-time PCR)及蛋白测定(Western Blot).2、对CBP+/-基因敲除小鼠外周血、骨髓细胞进行集落形成试验(CFC array),测定其不同基因修复途径关键酶的表达水平.3、提取CBP+/-基因敲除小鼠细胞核蛋白,建立基于Real-time PCR非同源末端连接(NHEJ)技术,研究CBP+/-小鼠通过NHEJ修复途径修复DNA双链断裂(DSB)能力的变化.结果:1、CBP基因敲低EML细胞系,在CBP基因敲低比例在60％以下时,随着CBP基因敲除,CFC能力呈下降趋势(P＜0.05),在CBP基因敲低比例在60％以上时,细胞CFC能力反而呈上升趋势(P＜0.05).
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