【摘 要】
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目的 筛选灭活真菌单克隆抗体对小鼠系统性白念珠菌感染模型的保护作用,并阐明其保护机制.方法 小鼠尾静脉注射预先灭活的白念珠菌SC5314,在免疫后第21天分离小鼠脾脏制
【机 构】
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中国人民解放军第二军医大学药学院新药研究中心
【出 处】
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全国首届真菌感染与宿主免疫学术研讨会
论文部分内容阅读
目的 筛选灭活真菌单克隆抗体对小鼠系统性白念珠菌感染模型的保护作用,并阐明其保护机制.方法 小鼠尾静脉注射预先灭活的白念珠菌SC5314,在免疫后第21天分离小鼠脾脏制备单细胞,通过与杂交瘤细胞融合、亚克隆、建株,制备腹水,纯化得到单克隆抗体.在体外通过ELISA检测单抗对灭活SC5314菌的效价；Western Blotting检测单抗与白念珠菌蛋白的结合；并在体外检测单抗对白念珠菌的抑制作用及对菌丝形成的最低抑制浓度.体内实验通过小鼠尾静脉预先注射2mg/kg的单抗,2h后用3×105白念珠菌SC5314攻击,观察小鼠生存率,评价单抗在小鼠体内预防侵袭性念珠菌感染的效果.结果 通过上述实验方法得到20个单克隆抗体,用ELISA检测结果显示抗体的效价范围在1∶400至1∶12800；单克隆抗体与白念珠菌蛋白结合的位置在55kDa.小鼠体内的结果表明在20种抗体中,有6种抗体可显著提高小鼠的生存率,尤其是15＃抗体,在30天内显著提高小鼠生存率至40％,而生理盐水对照组在7天全部死亡.通过体外抑制菌丝实验,证明15＃抗体抑制白念珠菌菌丝形成的最低浓度为25 μ g/ml.结论 预先注射抗体对侵袭性白念珠菌感染有预防作用,可显著提高小鼠的生存率,其保护机制可能是直接抑制菌丝的形成.
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