植病生防荧光假单胞菌产生的抗生物质在对重要作物土传病害病原菌的抑制过程中起着十分重要的作用.这些抗生化合物可能在作物根际直接对病原物产生拮抗,从而抑制病原物的生长和降低致病力;也可能间接地通过刺激植物的防御机制而起到防病作用.近年来的研究表明,假单胞菌抗生素基因表达的遗传调控受到GacS/GacA双因子、单一基因及群体密度感应三个水平的调控系统协同作用,因此,抗生素的产生是由一个复杂的遗传调控级联控制.荧光假单胞菌2P24是一株对多种重要土传病原菌具有拮抗作用的生防细菌,可产生2,4-DAPG、嗜铁素和蛋白酶等多种抗生物质.以小麦全蚀病为模式的生防机制研究表明:抗生素2,4-DAPG是2P24防治多种土传病害的最重要的生防因子.研究表明调控基因gacA对2P24产生的2,4-DAPG、HCN等生防因子是正调控作用。 本文根据从野生菌株2P24的染色体上克隆到一大约3.3kb的ECOR1片段，其包含完整的gacA功能基因，根据3.3kb的序列设计引物P1, P2和P3, P4;以pBS3.3为模板扩增，分A得到一1572 by(引物为Pi和P2)和830 by(引物为P3和P4)的片段，连接于自杀质粒pSK47s，得到gacA阅读框架内缺失突变的质粒pSK24。重组质粒pSK24通过2次同源重组完成gacA在2P24染色体上的缺失突变。