【摘 要】
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本文运用RT-PCR技术,从崇仁麻鸡肾脏总RNA中扩增出片断大小为315bp的鸡Gal-11编码cDNA序列全长。以pET32a为表达质粒构建了重组质粒pET32a-Gal-11,并在BL21(DE3)pLySs中进行融合表达。诱导剂IPTG在0.2～1.2mM的对重组蛋白的产量无明显影响,加入诱导剂1h开始可检出量重组蛋白质表达,在2h时其表达水平已接近最大量。融合表达蛋白经过初步分离、变性、组
【机 构】
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河南农业大学牧医工程学院,河南郑州 450002 河南农业大学牧医工程学院,河南郑州 450002
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本文运用RT-PCR技术,从崇仁麻鸡肾脏总RNA中扩增出片断大小为315bp的鸡Gal-11编码cDNA序列全长。以pET32a为表达质粒构建了重组质粒pET32a-Gal-11,并在BL21(DE3)pLySs中进行融合表达。诱导剂IPTG在0.2～1.2mM的对重组蛋白的产量无明显影响,加入诱导剂1h开始可检出量重组蛋白质表达,在2h时其表达水平已接近最大量。融合表达蛋白经过初步分离、变性、组氨酸亲和层析柱纯化以及复性,对纯化的表达蛋白进行琼脂糖弥散试验检测生物学活性。结果表明纯化蛋白对大肠杆菌、白色念球菌、金黄色葡萄球菌没有产生抗菌活性。崇仁麻鸡Gal-11在pET32a质粒表达体系中成功表达为鸡防御素多肽下一步的研究奠定基础。
其他文献
为了寻找更多的在鸡早期性腺发育中呈性别差异表达的基因,为禽类性分化相关候选基因的选择和深入研究提供一定的参考,本研究采用半定量RT-PCR检测了Anil-lin、TERF1、Exoc7、Hsc70这4个性别特异鸡胚消减文库中的基因在3.5～8.5d雌雄鸡胚中的表达。研究结果表明,Anillin、TERF-1、Exoc-7、Hsc-70 4个基因在雄性性腺中的表达量要高一些,另外,TERF1基因较其
本文旨在研究不同水平无机锌对肉仔鸡生长性能和组织锌含量的影响,并对每一指标进行曲线拟合(二次曲线与渐进性),从中筛选合适指标以确定肉仔鸡实用饲粮中锌的适宜添加水平。选用1日龄AA肉公鸡384只,随机分为8个处理组,每个处理6个重复,分别饲喂不加锌的玉米-豆粕型基础饲粮(对照组)和锌添加水平为20、40、60、80、100、120和140mg·kg(硫酸锌)的饲粮,试验期21d。结果表明:[1]随饲
本研究以番鸭()与高邮鸭(♀)的属间杂种骡鸭为素材,利用荧光原位杂交(FISH)技术对骡鸭45S rDNA进行基因定位,结果表明:在有丝分裂前期、中期分裂相和间期细胞中均可同时看到3个杂交信号,其中两个较强一个较弱。45S rDNA荧光原位杂交在中期染色体上的分布情况为:3个杂交信号中,一个位于1号常染色体短臂,另外两个位于两条微小染色体上。
以我国6个地方鸡种为研究对象,利用DNA测序技术测定了线粒体细胞色素C氧化酶I(cytochrome c oxidase I,COI)基因的两段序列,探讨COI这一特定基因的特定区段作为DNA条形码在识别地方鸡种方面的可行性和有效性。研究结果表明:所选择的两段序列中,经过多态性分析筛选,以Bar1序列(712位到1359位)突变位点较多,为24个,品种间平均多态性为3.860％,6个鸡种均有其特异
为进一步研究鸵鸟的防御素基因的功能和生物学活性。参照克隆得到的鸵鸟防御素cDNA片段,通过选用大肠杆菌偏好密码子对鸵鸟防御素基因进行改造,人工合成鸵鸟防御素基因,将成熟肽序列重组到表达载体pGEX-4T-1中,构建重组表达载体pGEX-4T-1-Defensin,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,从而采用在大肠杆菌中表达外源蛋白的方法,进行了鸵鸟防御素原核表达的研究。结果表明重组蛋白经变性复
运用RT-PCR法从五龙鹅的总RNA中克隆了IGF-1基因的cDNA序列(Gen-Bank登录号:DQ662932),克隆了表达IGF-1基因的IGF-Im序列,然后进行原核表达,并用实时荧光定量PCR技术检测了IGF-1基因在五龙鹅10种组织中的表达情况。分析结果如下:五龙鹅IGF-1基因的编码区长462bp,与鸭和鸡基因序列同源性分别为99.6％和98.1％,IGF-1分子空间结构由3个α-螺
黑素皮质素受体1(MC1R)基因是控制动物黑色素合成的重要基因。本文通过研究MC1R基因差异对番鸭羽毛颜色的影响,从分子角度初步探讨禽类黑色素沉积的分子机理。本实验对中国白羽番鸭和黑羽番鸭(各两只)进行克隆测序。结果表明:[1]MCIR基因氨基酸突变(Lys92Glu,Arg217Cys,Thr227Ala)与番鸭羽色有关；[2]构建禽类系统发生树研究发现,雪雁、皇雁和番鸭聚为一类；家鸡聚为一类,
本文旨在获得鸭A-FABP基因序列并进行序列分析,揭示该基因的组织特异性表达规律。运用RT-PCR技术获得鸭A-FABP基因序列,并用半定量RT-PCR方法研究该基因的组织特异表达规律。从35周龄母鸭脂肪组织中首次克隆了A-FABP基因的cD-NA序列,长度为422bp,包含了一个399 bp的完整CDS,编码132个氨基酸。该序列与鹅、鸡的A-FABP基因序列约有94％的同源性,而相应氨基酸序列
肌细胞生成素是生肌调节因子MRFs(MyoD、MyoG、Myf5和MRF4)家族的一员,具有控制成肌细胞融合的起始、促使成肌细胞增殖以及使单核成肌细胞转变成为多核的肌纤维等作用,在MyoD家族中具有中心地位。以鸡MyoG基因的内舍子为研究对象,根据鸡MyoG基因组序列以及mRNA序列信息,针对结构不明确的第二内含子区域设计上下游引物,采用PCR方法,首次成功克隆出鸡MyoG基因内含子Ⅱ,并进行序列
△6-脂肪酸脱氢酶是生成一系列不饱和脂肪酸的限速酶。根据GenBank上公布的预测鸡△6-脂肪酸脱氢酶基因序列XM421053设计引物进行RT-PCR,获得一个1323bp的cDNA片段。将所得到的片段同鹌鹑、普通牛、猕猴、猩猩等的△6-脂肪酸脱氢酶基因核苷酸序列进行同源性比较,同源性分别为94.69％、76.11％、75.28％、74.83％,氨基酸序列同源性分别为93.37％、78.78％、7