【摘 要】
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目的：精氨酸激酶(Arginine kinase,AK)在生物能的代谢、贮存和利用方面发挥至关重要的作用,研究表明AK也是存在于甲壳类水产品中的泛过敏原,本文旨在定位分析拟穴青蟹精氨
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目的：精氨酸激酶(Arginine kinase,AK)在生物能的代谢、贮存和利用方面发挥至关重要的作用,研究表明AK也是存在于甲壳类水产品中的泛过敏原,本文旨在定位分析拟穴青蟹精氨酸激酶的抗原表位.方法：以纯化的拟穴青蟹精氨酸激酶为抗原,免疫新西兰大白兔并纯化得到兔抗青蟹AK IgG抗体,利用该抗体对噬菌体随机十二肽库进行亲和淘选,借助表位分析软件LocaPep分析阳性克隆,确定AK的构象表位及关键氨基酸,采用重叠肽方法定位AK的线性表位.结果：通过对噬菌体展示技术淘选的阳性克隆分析确定了AK的4个构象表位依次为D3A4K43M1A5T49T44I7, L31 K33 V35T32E11 E18 F14S34 D37, V177 G172 M173 D176 Q178 T174 L181 K175 L187和R202 L170 Y203 E190 P205 W204 L187 T206Y145,以及4个构象表位的关键氨基酸分别为D3,K33,T174和W204；与此同时,采用重叠肽技术确定了甲壳类过敏患者血清IgE特异性识别的AK的6个线性表位,即AA 113-127,127-141,141-155,204-218,211-225,316-330.讨论：本实验通过噬菌体展示及软件分析、重叠肽技术定位分析了AK的抗原表位,为低致敏性水产食品的开发及抗过敏药物的研制提供了理论依据.
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