通过RNA干扰技术研究Ran在褐飞虱发育和繁殖中的作用

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Ran参与昆虫20E信号转导途径。在本文中,笔者克隆了一种为害严重的刺吸式害虫科褐飞虱体内的Ran基因并命名为NlRan,NlRan蛋白具有昆虫中Ran蛋白典型的保守结构。结果表明NlRan基因在褐飞虱发育的蜕皮过程中具有较高的表达丰度,此外NlRan基因在卵巢和脂肪体中的表达量较体壁、中肠和腿中的表达量高。通过对褐飞虱3龄、4龄、5龄若虫注射NlRan基因的c1sRNA、对照d1sGFP及空白对照水,注射3天后检测到NlRan基因在注射了dsNlRan的褐飞虱体内的表达量较注射了dsGFP虫体内的表达量分别降低了94.3%、98.4%和97.0%。同时我们发现NlFTZ-F1在处理后若虫中的表达水平较对照分别降低了89.268%和23.782%,相反NlKr-h71的表达水平分别上调了67.530倍和1.513倍。NlRan基因沉默后的若虫体重增重显著减少、处理若虫的下一龄期发育时间显著延长、若虫第3天死亡率大约为40%,且死虫表现出以下两种缺陷表型:①虫体细长并有细腰而蜕皮失败;②虫体背板上的旧表皮已经裂开但整个旧表皮还未完全蜕下而蜕皮失败。所有若虫在第十天时全部死亡。当对5龄若虫注射dsRNA时,与对照相比,NlRan和vitellogenin的表达量均显著下降,这就导致了处理褐飞虱的雌虫繁殖力、体重增重、蜜露分泌量均显著降低,卵巢解剖结果还发现处理褐飞虱的卵巢出现严重畸形从而无成熟卵形成。这些结果表明,NlRan编码的功能蛋白Ran参与了褐飞虱的发育和繁殖过程,也为NlRan能作为以dsRNA为基础的飞虱防治中的一个可能靶标提供了证据。
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