目的 肝纤维化通常是由于病毒、酒精、自身免疫性肝炎、代谢性疾病等长期损伤肝脏引起的,是造成患者死亡的重要原因。肝纤维化主要是指Ⅰ型胶原为主的细胞外基质的过度沉积,而肝脏细胞外基质的主要来源是肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)。在生理状态下,HSC细胞质中可见大量富含维生素A和甘油三酯的脂滴。在肝损伤过程中,HSC被激活,合成ECM,与此同时脂滴丢失。国外有研究证实,自噬导致HSC脂滴的丢失→动员脂滴中的甘油三酯→经线粒体β-氧化生成ATP→为HSC活化提供能量→从而促进HSC的活化；相反,阻断自噬则会提高HSC中脂滴及甘油三酯的含量,下调ATP的水平,从而抑制HSC活化。自噬为HSC的活化过程提供了必要的能量支持。但是常用的能有效抑制自噬的药物如3-MA、紫杉醇、渥曼青霉素等通常有明显的毒副作用,导致在肝纤维化等慢性疾病的应用中受到限制。因此,通过安全抑制HSC自噬调控HSC的活化成为重要的研究方向。近期多项研究显示,α-KG参与了自噬的调控。因此,我们假设调控α-KG可影响HSC的活化。α-KG不能透过细胞膜,因此我们利用能明确增高细胞内α-KG含量的类似物α-酮戊二酸二甲酯(dimethyl α-ketoglutarate, DMKG)对细胞内α-KG的水平进行干预,同时我们将对DMKG的安全浓度进行探索。方法 向大鼠肝星状细胞系HSC-T6和大鼠肝细胞系BRL-3A的培养基中加入梯度浓度的DMKG (0-32mmol/L),培养24h后,利用MTT法检测细胞生存率。用上述方法探索得到相对安全的DMKG浓度,向大鼠肝星状细胞系HSC-T6培养基中加入上述浓度的DMKG,培养24h后,利用RT-PCR法及western-blot法检测HSC活化指标CollagenⅠ、α-SMA的表达。结果 如图1～3所示。结论 DMKG对肝细胞及肝星状细胞有较大的安全浓度范围,且肝细胞对高浓度DMKG毒性的耐受性更好。安全浓度范围内的DMKG可抑制HSC的活化。