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目的:观察LPS诱导THP-I细胞炎症模型的炎症因子及NF-xB, JAK/STAT, MAPK, PPAR信号通路中NF-xB, STAT3、核转录因子激活蛋白AP-I、过氧化物酶体增殖物激活受体y活性的变化,筛选其靶通路,研究调补肺肾三法(补肺健脾方、补肺益肾方、益气滋肾方)对THP-I细胞NF-xB, STAT3转录因子的调控作用,以期为揭示调补肺肾三法方药抑制COPD炎症反应的分子作用机制及其特点提供依据。
方法:1.优化LPS诱导THP-1细胞炎症模型。2.含药血清的制备。日本大耳白兔96只,随机分为:正常对照组、补肺益肾方组、补肺健脾方组、益气滋肾方组,分别灌喂给予生理盐水、补肺益肾方药、补肺健脾方药、益气滋肾方药,每日2次,于最7次给药后1h,通过腹主动脉采血,离心分离血清,过滤分装,保存备用。3.观祭调补肺肾三法方药对转录因子NF-xB, STAT3表达的影响根据以上模型优化结果,分组干预细胞:空白血清组、模型组、补肺益肾组、补肺健脾组、益气滋肾组。每组血清分为20%, 40%两个浓度,ELISA法检测细胞因子IL-8, TNF-a,MMP-9。对于NF-xB信号通路,添加抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐组;对于JAK-STAT,信号通路,添加抑制剂stattic组,EMSA法检测转录因子NF-xB,STAT3的活性。
结果:1.LPS诱导THP-1细胞炎症模型。EMSA法检测1ug/mL LPS诱导THP-1细胞24h对转录因子NF-xB, STAT3, AP-1, PPAR活性的影响。与正常对照组比,1ug/mL LPS组NF-xB, STAT3探针结合程度增多(p<0.01);与正常对照组比较,1 ug/mL LPS组对AP-1, PPARy探针结合程度的变化无统计学意义。2. THP-1细胞中NF-xB, STAT3调控的调补肺肾三法含药血清对炎症反应机制的影响。
结论:1.1ug/mL LPS作用THP-1细胞24h能激活NF-xB, JAK-STAT通路的活性。优化细胞炎症模型的条件,选用1ug/mL LPS诱导THP-1细胞24h来建立炎症模型是适宜的。2.调补肺肾三法(补肺健脾方、补肺益肾方、益气滋肾方)均能下调模型组细胞分泌炎症因子IL-8, TNF-u, MMP-9的水平,抑制NF-xB,STAT3转录因子的活性。