【摘 要】
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目的 探讨新型P2Y样G蛋白偶联受体GPR17对脑缺血及缺氧缺糖(OGD)诱导皮层混合培养细胞中神经元损伤及小胶质细胞激活的影响.方法 ①以线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型,采
【机 构】
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浙江大学医学院药理学系,浙江杭州 310058
【出 处】
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第十五届中国神经精神药理学学术会议
论文部分内容阅读
目的 探讨新型P2Y样G蛋白偶联受体GPR17对脑缺血及缺氧缺糖(OGD)诱导皮层混合培养细胞中神经元损伤及小胶质细胞激活的影响.方法 ①以线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型,采用免疫组织化学、Western blotting、RTPCR以及免疫荧光等方法观察脑内GPR17的时空表达及细胞分布特点.大鼠侧脑室埋管给予GPR17 siRNA靶向沉默脑内GPR17表达,观察其对脑缺血急、慢性期神经元损伤和小胶质细胞激活的影响.②以OGD诱导大鼠皮层混合培养细胞的缺血性损伤,以GPR17 siRNA靶向沉默GPR17的表达,观察其对OGD诱导的原代皮层混合培养细胞中神经元损伤和小胶质细胞激活的影响.结果 ①缺血中心区,GPR17 mRNA及蛋白水平在再灌注24 h和7,14 d表达上调；缺血周边区,再灌注7,14 d表达上调.在正常大鼠脑组织,GPR17主要表达于神经元、少突胶质细胞.在缺血中心区,再灌注24 h GPR17主要表达于损伤的神经元、小胶质细胞和少突胶质细胞,再灌注14 d主要表达于增生激活的小胶质细胞,部分表达于少突胶质细胞；而在缺血周边区,再灌注24h以及14 d,GPR17主要表达于神经元、小胶质细胞和少突胶质细胞.星形胶质细胞不表达GPR17.大鼠侧脑室给予GPR17 siRNA成功抑制脑内GPR17表达,显著改善再灌注24 h神经症状、减少脑梗死体积以及神经元损伤；同样,也改善再灌注14d的脑萎缩和周边区的神经元损伤,并显著抑制小胶质细胞的增生激活.②大鼠原代皮层混合培养细胞中,OGD 1 h恢复24 h (OGD/R)诱导细胞活性降低,LDH释放增加,PI染色结果显示细胞坏死增加,以神经元死亡为主.GPR17 siRNA处理后减轻OGD/R诱导的细胞活性下降以及LDH释放,并减轻细胞坏死,以减轻神经元死亡为主；GPR17siRNA处理后能够改善小胶质细胞激活的形态变化.结论大鼠局灶性脑缺血后,脑内GPR17表达上调,介导缺血后急性神经元损伤以及亚急性/慢性期的小胶质细胞激活.GPR17还介导OGD诱导的大鼠皮层混合培养细胞中的神经元损伤和小胶质细胞激活.
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