【摘 要】
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目的:建立和优化从原代大肠癌组织中分离大肠癌干细胞样细胞方法,并初步探讨大肠癌干细胞样细胞与普通大肠癌细胞基因表达谱的异同。
方法:新鲜大肠癌组织先用胶原酶和透
【机 构】
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浙江大学医学院附属第二医院杭州,310009
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目的:建立和优化从原代大肠癌组织中分离大肠癌干细胞样细胞方法,并初步探讨大肠癌干细胞样细胞与普通大肠癌细胞基因表达谱的异同。
方法:新鲜大肠癌组织先用胶原酶和透明质酸酶消化成单个细胞悬液,再用MACS技术从细胞悬液中分离出CD133<+>/EMA<+>/CEA<+/->阳性的大肠癌干细胞样细胞,接种含MEF饲养细胞的平皿,原代培养后收集细胞,提取mRNA经线性放大后,用Affymetrix U133 plus 2.0cDNA表达芯片分析大肠癌干细胞样细胞与普通大肠癌细胞基因表达谱的异同,根据芯片分析结果经验证后,用PCR从HT-29细胞cDNA文库中克隆该基因,构建真核细胞表达质粒表达载体,转染大肠癌细胞株,分析该基因对细胞主要信息通路的影响。
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