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目的:急性移植物抗宿主病(aGVHD)是异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)最严重的并发症之一。T淋巴细胞是allo-HSCT后介导aGVHD的主要细胞,其不同亚群在移植后发挥了不同的作用。本研究对allo-HSCT后患者免疫重建过程中关键T淋巴细胞及相关细胞因子进行监测,探讨移植后T细胞亚群免疫重建过程中的特征及其与aGVHD之间的关系,籍此期望建立aGVHD早期诊断的生物学指标,并进一步为aGVHD寻找免疫治疗的重要靶点,最终实现降低移植患者的aGVHD相关死亡率,提高长期无病生存率。方法:2013年5月至2014年1月,64例患者进入临床研究。其中男性32例,女性32例,中位年龄27.5岁(12-66岁)。急性淋巴细胞白血病29例,急性非淋巴细胞白血病25例,骨髓增生异常综合征5例,急性混合细胞白血病2例,非霍奇金淋巴瘤(血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤IVA期)1例,再生障碍性贫血(重型AA,II型)1例,8P11综合症1例。亲缘全相合异基因造血干细胞移植(MSD-HSCT)12例,无关供者异基因造血干细胞移植(URD-HSCT)10例,亲缘半相合异基因造血干细胞移植(HRD-HSCT)42例。患者在allo-HSCT后每周采血1次,持续3-6次或者至患者出院结束采集。使用流式细胞技术检测Treg、Th1和Th17细胞数目;使用流式细胞CBA技术检测患者血清中IL-2、IL-6、IL-l0、IL-17、TNF-a及IFN-γ水平;使用Elisa技术检测血清中TGF-3水平。结果:64名患者进入随访,36例(56.3%)发生II-IV度aGVHD,其中10例(15.6%)发生Ⅲ-Ⅳ度aGVHD。aGVHD患者在发生aGVHD之前与未发生GVHD患者的细胞因子血清水平以及Treg、Th1、Th17细胞绝对值无统计学差异。aGVHD患者的IL-2(P=0.0231)、IL-10(P=0.0089)、TGF-β(P=0.0138)血清水平在aGVHD发生后早期显著高于无aGVHD患者;aGVHD患者在发生aGVHD后早期Treg细胞数量显著低于无aGVHD患者(P=0.0150)(图1)。对aGVHD患者发生aGVHD前后的上述细胞因子进行自身对照,发现IL-2、TGF-β血清水平在aGVHD发生后早期即较aGVHD发生前有明显的升高(P=0.0417,P=0.0168);而IL-10血清水平也有升高趋势(P=0.0697)(图2)。对移植患者IL-2、IL-10、TGF-β血清水平及Treg细胞绝对值和aGVHD发生的关系进行ROC分析,并进一步进行logistic回归分析。结果表明,IL-2、IL-10及Treg细胞水平三者的线性组合是判断aGVHD发生的理想模型,其线性公式为:1.656+0.103×IL-2-0.052×IL-10-0.037×Treg。该线性组合的ROC曲线下面积为0.89(95%CI,0.78-0.99,P=0.0002),大于上述任意单一指标的曲线下面积。该模型可在图中"A"、"B"两个点取到最大约登指数,"A"点灵敏度为70.83%,特异度为91.67%;"B"点灵敏度为79.17%,特异度为83.33%(图3)。结论:移植患者血清IL-2、IL-10、TGF-β水平的升高对aGVHD早期临床诊断的确立能提供帮助,并有望为临床提供进一步免疫靶向治疗的依据。Treg细胞作为一种免疫调节细胞,在aGVHD发生的早期比例代表了总体免疫抑制的强度,其水平和aGVHD的发生呈负相关。IL-2、IL-10及Treg细胞水平三者的线性组合是判断aGVHD发生的理想模型,能够为aGVHD的早期诊断提供较为可靠的依据。