百草枯诱导AML12细胞凋亡过程中线粒体活性氧作用的初步研究

来源 :中国毒理学会第七次全国毒理学大会暨第八届湖北科技论坛 | 被引量 : 0次 | 上传用户:icesoul8585
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【目的】探讨百草枯诱导AML12细胞凋亡过程中线粒体活性氧的作用。【材料和方法】AML12细胞给予0、25、50、100、200、300μM的百草枯处理,分别采用MTT法检测细胞活力,AnnexinV/PI双染法结合流式细胞术检测细胞凋亡率,DCFH-DA荧光探针经流式细胞仪测定细胞内活性氧水平,MitoSOX荧光探针观察线粒体活性氧变化,激光共聚焦测定JC-1探针荧光强度检测线粒体膜电位变化。【结果】25-300μM的百草枯处理后可以诱导AML12细胞活力下降,具有显著的剂量效应关系(p<0.05);与对照组相比,300μM的百草枯作用24 h可明显诱导AML12细胞发生凋亡(p<0.05);百草枯处理24h后细胞内活性氧依次增加(p<0.05),25-100μM的百草枯作用24 h可以剂量依赖性地增加线粒体活性氧的水平(p<0.05),而200和300μM的百草枯作用24 h降低线粒体活性氧水平(P<0.05)。细胞活力下降与细胞内活性氧升高呈现负相关趋势(Pearson相关系数r=-0.9004,p<0.05);而细胞活力与线粒体活性氧的变化无明显相关性(r=0.1688,p>0.05)。晚期凋亡细胞的比例与细胞内活性氧呈正相关关系(Pearson相关系数r=0.9565,(p<0.01),与线粒体活性氧无相关关系(r=-0.4783,p>0.05);JC-1检测线粒体膜电位结果显示,与对照组相比,300μM的百草枯处理24h使线粒体膜电位显著降低,(p<0.05)。【结论】百草枯诱导AML12细胞凋亡过程主要由细胞整体水平的活性氧介导,提示线粒体活性氧的增加可能在百草枯诱导肝损伤的早起阶段中发挥了作用。
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