根据GenBank公布的伪狂犬病病毒上海株(PRV-SH)编码gE的基因序列特点,利用DNAStar及PrimerPremer专业软件分析并设计了一对引物,扩增出PRV-SHgE主要抗原表位基因区段(660bp),构建了分泌表达载体pPICZaC-pgE,经电转化整合入巴斯德毕赤酵母野生型菌株X-33,经筛选、诱导表达,获得重组酵母工程菌X-33/pPICZaC-pgE,使gE主要抗原表位基因在酵母培养液上清中分泌表达,经Western-blotting验证表达产物具有抗原性.将表达产物透析后作为ELISA抗原,通过对其特异性、敏感性及工作条件的优化和对47份PRV阴性血清的检测结果的统计学分析,建立了PRVgE-ELISA鉴别诊断方法.通过对146份临床血清样品的检测分析,结果表明与IDEXXgE-ELISA试剂盒的符合率达91％以上.此方法可用于gE基因缺失PRV疫苗免疫动物和PRV野毒感染动物的鉴别诊断。