玉米(Zea mays L.)是世界重要的粮食与饲料作物,在我国属第一大粮食作物。河南是我国主要粮食产区之一,玉米在河南省是最主要的秋季粮食作物。根据笔者前期调查结果,层出镰刀菌F.Proliferatum(Matsushima)Nirenberg是引起河南玉米穗腐病的主要病原菌,该菌对玉米的为害不仅表现在产量上,更重要的是其产生的真菌毒素对玉米作为粮食及饲料的安全性构成严重威胁。目前尚无关于F.proli feratum胞外分泌物及其致病性的相关报道。研究F.proliferatum分泌的胞外酶及毒素等化合物与致病性的关系,对深入认识该病原菌致病机理和科学防控玉米穗腐病有重要意义。本研究以玉米穗腐病籽粒分离得到的层出镰刀菌菌株Fp1为供试菌株,分别以纤维素诱导培养基、果胶诱导培养基、淀粉诱导培养基和脂肪诱导培养培养病原菌,检测发现该菌可以产生淀粉酶、果胶酶和纤维素酶。其中果胶酶透明圈直径最大。菌株Fp1接入Czapek’s液体培养基中(100 mL/250 mL),28℃C,150 r/min震荡培养12 h。用0.22μm微孔滤膜过滤上清液,首先用30 kD超滤管9 000 r/min离心20 min滤除分子量较大蛋白,再用3 kD超滤管9 000 r/min离心20 min滤除分子量较小蛋白,获得分子量在3 kD以下的培养滤液。取Czapek’s液体培养基,用0.22μm微孔滤膜过滤后作为对照液。取3叶期玉米幼苗,用去离子水冲洗干净叶片。用毛细管管口轻压叶片。产生轻微的创伤后,在伤口处滴加一滴菌丝培养滤液(每组处理10株幼苗,做5组重复)。对照滴加一滴过滤后的Czapek’s液体培养基。将处理后的玉米植株在光照培养箱中,28℃C培养12 h(湿度为60%)。结果显示,胞外分泌物处理的叶片伤口水渍状斑面积大于对照,水渍状斑主要沿伤口边缘及叶脉方向扩展。由此推测胞外分泌物可能参与了F.proliferatum侵染的过程。