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研究目的:本研究拟从体外细胞学、分子生物学及临床疗效观察等层面对化毒栓及其主要成分莪术油治疗宫颈HPV感染的有效性进行评价,并探讨其内在作用机制,为中医药防治宫颈癌提供研究依据。研究方法:1.临床研究:将42例宫颈HPV感染的患者随机分成治疗组与对照组各21例。治疗组应用化毒栓治疗,每晚1粒,阴道置药,于月经干净3天后连续治疗2周,2周为1个疗程,间隔2周后再进行第2个疗程治疗,共治疗3个疗程;对照组应用保妇康栓治疗,每晚2粒,阴道置药,于月经干净3天后连续治疗2周,2周为1个疗程,间隔2周后再进行第2个疗程治疗,共治疗3个疗程。经期停药,于第四个月月经干净三天复查。通过两组间及组内治疗前后进行比较,分析患者治疗前后临床症状积分变化及HPV转阴的情况,对化毒栓治疗宫颈HPV感染的临床疗效进行评价。2.实验研究:2.1细胞培养及细胞增殖曲线的测量:体外培养HeLa细胞,分别加入莪术油和同样体积的空白溶剂(DMSO)。每组细胞设立3个平行对照。通过MTT法检测该药对细胞增殖的影响。2.2细胞中Survivin mRNA的表达含量检测:应用荧光定量PCR检测法,以GAPDH为内参,对空白对照组、干扰素组、莪术油组的Hela细胞中SurvivinmRNA水平进行定量分析。研究结果:1.临床研究:本次临床研究共纳入42例病例,治疗组与对照组各21例。治疗组以活血解毒燥湿为法,经化毒栓治疗后HPV转阴12人,HPV转阴率为57.14%。通过临床症状评分所得的疗效结果中,治疗组纳入21人,痊愈1人,显效11人,有效6人,无效3人,总有效率为85.71%;通过中医证候评分所得的疗效结果中,治疗组纳入21人,痊愈5人,显效6人,有效9人,无效1人,总有效率为95.24%。治疗组治疗前后临床症状积分及中医证候积分经统计分析所得P值均小于0.05,差异有统计学意义。对比治疗前后主要症状的变化,白带量、色、味、质以及腰腹痛、大小便异常等情况均有有不同程度的改善,其中以白带情况改善最为明显。对照组使用保妇康栓治疗,经治疗后HPV转阴8人,HPV转阴率为38.10%。通过临床症状评分所得的疗效结果中,对照组纳入21人,痊愈1人,显效6人,有效8人,无效6人,总有效率71.43%;通过中医证候评分所的疗效结果中,对照组纳入21人,痊愈1人,显效5人,有效10人,无效5人,总有效率76.19%。对照组治疗前后临床症状积分及中医证候积分数据通过统计分析后所得P值均小于0.05,差异有统计学意义。对比治疗前后主要症状的变化,白带量、色、味、质,腰腹痛以及大小便异常情况均有不同程度的改善,其中以白带情况改善最为明显。治疗组与对照组治疗前后临床症状改善情况的比较经统计分析所得P值大于0.05,说明两组治疗前后在临床症状改善情况上无统计学差异。治疗组与对照组治疗前后中医证候改善情况的对比经统计分析所得P值小于0.05,且治疗组治疗前后差值水平高于对照组,说明化毒栓对于中医证候的改善效果优于保妇康栓。治疗组与对照组之间HPV转阴率的比较经卡方检验所得P值大于0.05,说明两组HPV转阴情况无统计学差异。2.实验研究:2.1 莪术油可抑制宫颈癌Hela细胞的增殖,且在一定浓度内,其抑制作用有随浓度升高逐渐加强的趋势。2.2培养12h时,对照组使用干扰素开始对Survivin基因mRNA的表达有较明显的抑制作用;培养12-48h时,干扰素能抑制该基因的mRNA的表达;培养24h内,其表达抑制随时间的增长逐渐加强,在24h时,干扰素对宫颈癌Hela细胞Survivin基因mRNA的表达抑制达到最佳。2.3使用低剂量莪术油干扰Hela细胞,培养24h-48h内,低剂量莪术油对其Survivin基因mRNA的表达产生较为明显的抑制作用,且随时间的增长其抑制作用有逐渐加强的趋势;培养48h时,低剂量莪术油对Survivin基因的抑制作用达到最佳效果,且在该时间点其抑制作用优于干扰素组。2.4使用中剂量莪术油培养5h及24h时,莪术油对Hela细胞Survivin基因mRNA表达的抑制作用较为明显。研究结论:1.临床研究:以活血解毒燥湿为基本治法的化毒栓能有效阻断湿毒蕴结证患者宫颈HPV的持续感染,尤其对改善宫颈局部的反应效果显著,同时有助于改善全身症状。2.实验研究:莪术油能有效抑制宫颈癌Hela细胞的生长,并对Hela细胞Survivin基因的表达情况有一定的抑制作用,但其抑制细胞增殖的最佳浓度及时间与抑制基因表达的最佳浓度及时间未能重合,猜测莪术油可能通过抑制Survivin基因的表达抑制宫颈癌Hela细胞的生长增殖,但莪术油抑制Hela细胞增殖的主要的作用机制不仅限于该靶点,需要进行更为深入的研究。