鲤鱼基质金属蛋白酶-2的基因克隆、原核表达及性质分析

来源 :中国食品科学技术学会第十届年会暨第七届中美食品业高层论坛 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qzyss
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
  基质金属蛋白酶参与动物胶原蛋白的新陈代谢,但其在水产动物中的存在情况少有报道.本研究利用RT-PCR和RACE技术从鲤鱼(Cyprinuscarpio)肌肉中克隆得到基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的cDNA全长共2789 bp,开放阅读框共1971bp,编码657个氨基酸残基.鲤鱼MMP-2含有四个保守的结构域,包括N端含29个氨基酸残基的信号肽、前肽区、含有三个重复Ⅱ型纤连蛋白的催化区以及C端类血红蛋白结合区.根据MMP-2的结构特点,在大肠杆菌中表达由351个氨基酸残基组成的MMP-2催化区,利用His标签亲和层析柱纯化表达蛋白.通过明胶酶谱检测,结果显示重组的MMP-2有较强分解明胶的活性.进一步研究表明,重组MMP-2在pH 8.0时活性最高,最适温度为40℃.金属蛋白酶抑制剂EDTA、EGTA和1,10-phenanthroline对该酶有较强的抑制活性,而其他类型的蛋白酶抑制剂则无抑制活性,Ca2+能够显著增强MMP-2的活性,表明该酶为Ca2+依赖型金属蛋白酶.重组MMP-2不仅在37℃,甚至4℃都可以有效降解鲤鱼肌肉Ⅰ型胶原蛋白,证实了MMP-2参与鱼体死后的肌肉软化的功能.
其他文献
  目的:探讨谷胱甘肽(Glutathione,GSH)对Aβ25-35诱导PC12细胞氧化损伤的保护效果,建立阿尔茨海默病(Alzheimers Disease,AD)的细胞模型,为抗氧化肽在预防和治疗AD方面提供
会议
  目的:本文研究了牛蒡叶对金黄色葡萄球菌的抑制作用和机制,并分析了牛蒡叶组分的活性成分.方法:首先,通过柱层析分离得到了牛蒡叶的4个分离组分,分别是水洗组分,20%、34%、70
会议
  目的:本实验从虾夷马粪海胆生殖腺中提取纯化出一种多聚甘露糖物质,并对其结构组成特征进行了研究.方法:以海胆生殖腺干粉为材料提取多糖,经过木瓜蛋白酶解提取、乙醇醇沉
会议
  目的:本课题旨在研究鸡肉蛋白与芸豆蛋白在转谷氨酰胺酶作用下发生共价交联,并探讨蛋白质的交联情况,以及交联对蛋白质重要功能性质(凝胶性、乳化性、起泡性)的影响.方法:
会议
  海参受到紫外线照射后会发生自溶现象,给海参的贮藏与加工带来不便.从氧化应激的角度研究紫外线诱导海参自溶的相关因素,为完善海参自溶机理奠定一定的理论基础.以活体海参
会议
  目前需要开发一种有效的方法以提高燕麦分离蛋白的酶解的效率及其酶解产物对血管紧张素转换酶(ACE)抑制的活性.本文利用超声预处理后将样品进行碱性蛋白酶酶解,对酶解产物
会议
  在外界环境因素的作用下,铁观音茶叶容易发生陈化甚至劣变,导致成茶品质差,降低茶叶档次.本研究利用固态发酵得到的单宁酶对低档铁观音干茶叶进行二次加工处理,促进茶叶内某
会议
  自溶是导致海参体壁胶原蛋白降解的主要原因,是海参保鲜、贮藏、运输和加工等环节的难题之一.但是,目前针对引起海参自溶过程中胶原蛋白降解的蛋白酶研究报道甚少.本研究
会议
  鲍鱼以海藻类为食,其消化道内含有多种水解多糖的酶类.本研究通过硫酸铵盐析、SP-Sepharose阳离子柱层析、Sephacryl S-200凝胶过滤层析相结合的方法,从皱纹盘鲍内脏中分
会议
引导小学生通过项目学习完成语文学科毕业报告,既可避免复习期间因刷题而产生的厌学情绪,持续激发学生学习兴趣,又能全面培养学生项目学习能力,在整体建构中把学习引向深入,