厌氧活性污泥DGGE图谱的优化

来源 :2008年中国微生物生态学年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chenchenyaya
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在反硝化抑制硫酸盐还原菌的研究中,对厌氧硫酸盐还原污泥和反硝化污泥的DGGE图谱进行了优化,研究了硫酸盐污泥DNA的提取方法,应用通用引物958F/1401R扩增16SrDNA序列,探讨了不同的退火温度对DGGE指纹图谱多样性影响,同时采用时间进程法对DGGE图谱进行优化。结果表明,采用PBS洗涤污泥和超声震荡有利于硫酸盐还原污泥DNA提取;采用958F/1401R为引物时,扩增片段大约500 bp,不同的退火温度对DGGE指纹图谱的多样性影响不显著;采用时间进程法可以很好地再现不同电泳阶段对样品的分离效果,最佳变性剂梯度为40%~600%,在130V电压下,最佳电泳时间为5h。
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