【摘 要】
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目的:分离鉴定幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)临床菌株,分析其CagA蛋白的磷酸化基序EPIYA,探讨东亚株H.pylori cagA序列的结构特点. 方法:选取胃相关疾病患者的
【机 构】
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贵阳医学院分子生物学重点实验室,贵州贵阳550004
【出 处】
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第四届吴宪吴瑞国际学术研讨会、第九届全国医学生物化学与分子生物学、第六届全国临床应用生物化学与分子生物学联合学术讨论会
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目的:分离鉴定幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)临床菌株,分析其CagA蛋白的磷酸化基序EPIYA,探讨东亚株H.pylori cagA序列的结构特点. 方法:选取胃相关疾病患者的胃黏膜组织,剪碎后接种于哥伦比亚血琼脂平板,微需氧培养,菌落生长后通过尿素酶实验、革兰氏染色、显微镜检对菌株进行初步鉴定,提取菌落基因组,PCR扩增H.pylori 16S rRNA基因进行测序鉴定;扩增cagA基因全长序列,连接入pMD 18-T载体,将重组质粒转入感受态E.coli DH5 α,测序鉴定重组质粒DNAStar和MEGA 6软件对cagA序列进行比对及聚类分析.结果:成功分离H.pylori共计26株,构建pMD 18-T/cagA克隆载体后,完成26株cagA基因全长测序,通过序列比对和聚类分析,发现有6株表现为西方型,20株为东亚型,东亚型CagA第815~834位点存在13个氨基酸的缺失、部分缺失或变异,西方型中有3株丢失磷酸化位点EPIYA-C.聚类分析显示分别聚类为东亚群、西方型东亚群以及西方群三群. 结论:分离的H.pylori以东亚株为主,但也存在西方株感染;东、西方型CagA在EPIYA基序及侧翼序列有明显差异,菌株之间存在明显聚类关系.
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