论文部分内容阅读
目的：构建CTLA-4 基因重组腺病毒，为诱导移植免疫耐受疫苗的研究奠定基础。 方法：将质粒pcDNA3.1-CTLA-4 经双酶切后得到CTLA-4 基因片段，测序后连接入腺病毒穿梭载体pshuttle-CMV。穿梭载体pshuttle-CMV-CTLA-4 与含腺病毒基因组的辅助质粒BJ1583 经电转化至AD293 细胞，在重组酶作用下进行重组，包装成重组腺病毒(AD/CTLA-4)颗粒，用PCR、酶切方法及Westernblot 进行鉴定。并用动物免疫实验来检测该重组腺病毒的免疫活性。 结果：从质粒pcDNA3.1-CTLA-4 中经双酶切后得到CTLA-4 基因片段，DNA 序列测定证实穿梭载体pshuttle-CMV-CTLA-4 构建正确。穿梭载体pshuttle-CMV-CTLA-4 与含腺病毒基因组的辅助质粒BJ1583 经电转化至AD293 细胞，出现明显细胞病变效应。收集重组腺病毒(AD/CTLA-4)，PCR 法、酶切法均证实该重组腺病毒含有CTLA-4 基因，Westernblot 证实该重组腺病毒在AD293细胞中能表达CTLA-4 基因。该重组腺病毒免疫小鼠不能激发小鼠的细胞免疫反应，证明该重组腺病毒具有诱导免疫耐受活性。 结论：成功构建了CTLA-4 基因重组腺病毒，该重组腺病毒可诱导免疫耐受。