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目的:构建CTLA-4 基因重组腺病毒,为诱导移植免疫耐受疫苗的研究奠定基础。 方法:将质粒pcDNA3.1-CTLA-4 经双酶切后得到CTLA-4 基因片段,测序后连接入腺病毒穿梭载体pshuttle-CMV。穿梭载体pshuttle-CMV-CTLA-4 与含腺病毒基因组的辅助质粒BJ1583 经电转化至AD293 细胞,在重组酶作用下进行重组,包装成重组腺病毒(AD/CTLA-4)颗粒,用PCR、酶切方法及Westernblot 进行鉴定。并用动物免疫实验来检测该重组腺病毒的免疫活性。 结果:从质粒pcDNA3.1-CTLA-4 中经双酶切后得到CTLA-4 基因片段,DNA 序列测定证实穿梭载体pshuttle-CMV-CTLA-4 构建正确。穿梭载体pshuttle-CMV-CTLA-4 与含腺病毒基因组的辅助质粒BJ1583 经电转化至AD293 细胞,出现明显细胞病变效应。收集重组腺病毒(AD/CTLA-4),PCR 法、酶切法均证实该重组腺病毒含有CTLA-4 基因,Westernblot 证实该重组腺病毒在AD293细胞中能表达CTLA-4 基因。该重组腺病毒免疫小鼠不能激发小鼠的细胞免疫反应,证明该重组腺病毒具有诱导免疫耐受活性。 结论:成功构建了CTLA-4 基因重组腺病毒,该重组腺病毒可诱导免疫耐受。