食血蝙蝠唾液纤溶酶原激活剂高效表达毕赤酵母菌株的构建

来源 :2007年生物产业技术研讨会暨工业生物技术及分离纯化技术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:gaodmljs
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食血蝙蝠(Desmodus rotundus)在吸食大型动物血液时能保持创口处血流的畅通。本课题根据食血蝙蝠唾液中发现的纤溶酶原激活剂(Bat-PA)的全长基因序列(Genbank登录号105082),首次在体外人工合成Bat-PA基因并亚克隆到巴斯德毕赤酵母(Pichia Pastoris)表达载体pPIC9K上;转化毕赤酵母菌株GS115后,通过抗G418浓度梯度筛选、毕赤酵母中小量表达后纤维平板泫测活以及SDS-PAGE电泳检测,筛选出高拷贝高表达的Bat-PA稳定菌株。目前,Bat-PA主要来自哺乳动物细胞,如中国仓鼠卵巢细胞(CHO)、胚胎卵巢肾细胞(BHK)、非洲绿猴肾细胞(COS),代价高昂。在毕赤酵母中生产Bat-PA可以降低成本,增加产率,为探索Bat-PA作为新一代济栓剂奠定基础。
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