目的:观察重复给药后犬的毒性反应,为申报临床试验提供资料。方法:实验选用健康Beagle犬,体重约7～9kg。设溶剂对照组、水蛭素低剂量组(6mg·kg-1·d-1)、中剂量组(18 mg·kg-1·d-1)和高剂量组(54 mg·kg-1·d-1)。每组雌雄各半。采用缓慢静脉注射的方法, 注射持续时间为10分钟,每日一次。注射药液容量为每公斤体重2毫升。溶剂对照组输注相应容积的稀释液。给药期为14天。药前、药后2小时和每周以及停药每周观察动物的一般药物反应,测定体重和体温,进行尿液生化分析、心电图、眼科、凝血和纤溶指标、外周血有形成分指标、血清生化指标、血清中Beagle犬抗重组水蛭素抗体检测,在停药当天和停药 28天,用安死术处置各试验组的半数动物,取组织、脏器标本进行脏器称重和病理组织学检查。结果:重组水蛭素6 mg·kg-1·d-1剂量组动物的注射药物针眼部位的压迫止血时间延长, 给药后活化部分凝血活酶时间延长,在脾脏一些白髓外周有新鲜出血灶。这些变化与重组水蛭素抗凝血酶的药理活性有关。上述指标的变化程度较轻,在停药后很快恢复正常。故认为 6 mg·kg-1·d-1剂量为基本安全剂量。中剂量18 mg·kg-1·d-1组动物除有低剂量组变化外,尿蛋白阳性(+),红细胞计数降低,肌酐升高,脾脏有出血灶。因为重组水蛭素引起一定程度的脏器出血,可能会影响肾脏等脏器的功能,同时导致轻度的贫血。高剂量54 mg·kg-1·d-1除有中剂量组类似的变化外,转氨酶升高,心脏、肝脏、肾脏和肺脏等多个脏器有出血灶,但不引起所在脏器实质细胞的异常变化。表明在高剂量条件下重组水蛭素可引起明显的出血,但这类变化主要是重组水蛭素抑制凝血酶药理活性放大的表现。结论:重组水蛭素除作用于凝血系统外,对其它系统和脏器无明显的毒性。停药后因抑制凝血酶引起的出血消失。本试验未得到NOAEL。