金边虎皮兰软腐病的病原菌鉴定

来源 :中国植物病理学会2019年学术年会论文集 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yuyanbbs
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金边虎皮兰(Sansevieria tifasciata Prain)是虎皮兰属中具有较高观赏价值的品种之一。2016年9月,从河南省南阳市当地花卉市场购买的金边虎皮兰的叶片上发生一种罕见的软腐病。发病初期病部组织呈水渍状,病斑边缘背光呈半透明状,多始发于叶片边缘,呈圆弧状向叶片中部扩展,湿度大时病情扩展迅速,致组织软腐,严重时叶片折倒甚至整株腐烂,低湿度下病斑扩展明显受限,病部表皮组织皱缩,病部呈灰白至灰褐色。从病斑中部常见污白色或黑褐色霉状物。剪取病健交界组织块(约3~4mm2),用75%酒精对病叶组织处理10 s,升汞表面消毒50~80s,经无菌水冲洗8次后置于PDA平板上26℃培养4~5d,获得形态一致的曲霉分离物。经单孢分离后随机取一株(An-1)进行鉴定。在PDA培养基上An-1的菌落呈圆形,初期白色后转黑褐色至深黑色。分生孢子着生在分生孢子头上,单胞,球形,无色透明至浅褐色,直径约3.5~3.7μm (n=100)。用刺伤接种法对3个虎皮兰品种(金边虎皮兰、广叶金边虎皮兰、短叶金边虎皮兰)做致病性测定。结果表明,菌株An-1对长叶的金边虎皮兰的致病力最强,病斑扩展最快,其次为广叶金边虎皮兰。短叶金边虎皮兰对该菌的抗性最强(接种点伤口不形成病斑)。从金边虎皮兰与广叶金边虎皮兰叶片接种点产生的病斑上再分离获得了与接种菌An-1形态一致的曲霉,依据柯赫法则证明了菌株An-1为金边虎皮兰软腐病的致病菌。用引物Beta-F(5’-cagctcgagcgtatgaacgtct-3’)和Beta-R (5’-cggaagtcggaagcagccatc-3’)扩增菌株An-1的β-微管蛋白基因序列,对该菌进行分子鉴定。扩增获得的菌株An-1的β-微管蛋白基因序列长度为935bp。BLAST比对结果表明,菌株An-1的β-微管蛋白基因序列与GenBank上登记的多株黑曲霉(Aspergillus niger)的相关序列的最大相似性达99%。在构建的基于β-微管蛋白基因序列的系统发育树中,菌株An-1与A.niger (GenBank登录号:MF150906 and MG701893)以100%自举值相聚一群,明显区别于其他Aspergillus spp.,支持菌株An-1属A.niger。黑曲霉主要引起瓜果类作物的采后病害,该菌引起金边虎皮兰软腐病为首次报道。
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