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本研究根据小肠结肠炎耶尔森氏菌YST基因和空肠弯曲杆菌VSI基因的保守序列设计引物和探针，通过优化反应条件与参数，建立了可同时检测小肠结肠炎耶尔森氏菌和肠弯曲杆菌的双重荧光PCR方法。结果显示，该方法敏感度高，对两种细菌的检测低限均低于10cfu/g。特异性强，仅对目标菌呈阳性反应，对常见非目标菌均呈阴性反应，重复性好，定量检测批内和批间的变异系数均小于1％，快速简便，能在1个工作日内完成对猴YE菌和空弯菌的检验，经济实惠，可同步检验耶尔森氏菌和空弯杆菌，效率是单重荧光PCR的2倍。粪便杂质对反应敏感度有一定程度的干扰，可通过对样品增菌提高反应敏感度得以弥补。