【摘 要】
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目的：分析沙眼衣原体pORF5蛋白对炎症反应的影响,并初步探讨其分子机制。方法：构建pORF5原核表达重组体pGEX-6p/pORF5、重组体经IPTG诱导表达GST-pORF5融合蛋白,融合蛋白经
【机 构】
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南华大学医学院病原生物研究所 421001
【出 处】
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中国免疫学会第十届全国免疫学学术大会
论文部分内容阅读
目的：分析沙眼衣原体pORF5蛋白对炎症反应的影响,并初步探讨其分子机制。方法：构建pORF5原核表达重组体pGEX-6p/pORF5、重组体经IPTG诱导表达GST-pORF5融合蛋白,融合蛋白经蛋白酶酶切制备不含GST标签的pORF5蛋白；用0～36μg/mL不同浓度的pORF5蛋白体外刺激THP-1细胞,分别收集0h、8h、 16h、24h、36h细胞及培养上清,ELISA测定IL-1β和IL-18的含量；分别用NALP3 siRNA、ASC siRNA转染THP-1细胞24h或用Caspase-1和p38抑制剂预处理THP-1细胞30min后,再用pORF5蛋白(24μg/mL)刺激THP-1细胞24h,ELISA测定IL-1β、IL-18和Caspase-1表达水平,qRT-PCR测定IL-1β、IL-18和NALP3炎性体mRNA的表达,Western blot测定Caspase-1的表达及p38磷酸化水平。
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