【摘 要】
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目的：构建TIMP-1小干扰RNA真核表达载体并观察其对肝星形细胞株TIMP-1 mRNA表达的作用.方法：根据siRNA设计原则,在TIMP-1 mRNA序列中选择2个特异性靶序列(447-465nt、552-5
【机 构】
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Department of Gastroenterology, the First Affiliated Hospital of Zhengzhou University, Zhengzhou 450
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目的：构建TIMP-1小干扰RNA真核表达载体并观察其对肝星形细胞株TIMP-1 mRNA表达的作用.方法：根据siRNA设计原则,在TIMP-1 mRNA序列中选择2个特异性靶序列(447-465nt、552-540nt)及1条无关对照序列；体外合成对应发卡样DNA片段,将其克隆人pGEM-T连接载体,BamHⅠ和XhoⅠ分别双酶切pGEM-T及表达载体pRNAT-U6.2,胶回收粘末端将特异序列定向亚克隆构建TIMP-1 pRNAT-U6.2/siRNA载体,用脂质体包裹转染入T6细胞,采用RT-PCR检测TIMP-1 mRNA表达水平的变化.结果：所构建的TIMP-1 pRNAT-U6.2/siRNA载体,经酶切鉴定与测序,结果显示特定位点靶序列与设计序列完全一致；转染T6细胞后, IMP-1 mRNA表达明显降低.结论：成功构建TIMP-1 siRNA载体TIMP-1 pRNAT-U6.2/siRNA,转染T6细胞可以有效抑制TIMP-1 mRNA的表达.
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