论文部分内容阅读
目的：观察不同葡萄糖浓度对不同起始代龄人二倍体成纤维细胞IMR-90细胞生长增殖速度(每传一代所需天数,days/PD)、平均存活天数、平均寿限及衰老相关-β-半乳糖苷酶(senescence association-β-gal,SA-β-gal)染色等细胞衰老生物指标的影响,为评估不同程度热量限制(caloric restriction, CR)及CR起始年龄、作用时间可能对人类产生抗衰老作用的指标检测提供实验依据.方法：采用细胞生长曲线、细胞增殖速度和SA-β-gal染色等细胞衰老生物指标,分别对20％～60％葡萄糖限制和不同代龄起始培养IMR-90细胞生长曲线、增殖速度、平均存活天数、平均寿限及SA-β-gal染色等结果进行分析,建立细胞衰老生物标记评价热量限制延缓衰老体外模型系统.结果：①与各自正常对照组比较,采用60％葡萄糖限制(60％ glucose restriction,GR)从30、35和40PD等IMR-90细胞稳定生长阶段起始培养均可以使细胞平均存活天数显著增加分别为14.7％、12.6％和12.3％;采用40％ GR从26 PD起始培养可以使细胞平均存活天数和平均寿限均显著增加分别为16.7％和1 1.4％;采用高糖(22.5 mmol/L glucose,HG)从26、30、35、40和45 PD起始培养平均寿限减少分别为26.9％、32.8％、35.4％、39.3％和42.9％.②与各自正常对照组比较,采用60％ GR从30、35、40 PD起始培养在5 PD传代后可以显著减慢细胞增殖速度直至细胞衰老,其减慢的程度与细胞起始代龄呈正相关;采用40％ GR从30 PD起始培养在10 PD传代后可以显著减慢细胞增殖速度直至细胞衰老.③与正常对照组53PD晚期细胞表现SA-β-gal染色阳性率≥95％且呈衰老细胞形态比较,采用60％ GR从30和35PD起始培养53PD晚期细胞SA-β-gal染色着色较浅,仍有部分细胞保持成纤维形态;采用高糖从26、30、35、40和45 PD起始培养晚期细胞分别提前7、6、5、4和3 PD表现出衰老细胞特性.结论：①40％～60％降低培养条件中葡萄糖浓度可能通过减慢IMR-90细胞增殖速度来延长细胞平均存活天数或平均寿限;其影响细胞增殖速度的程度与细胞起始代龄、GR程度和GR持续时间呈正相关.②高糖培养可以显著诱导IMG-90细胞提前衰老.③为热量限制延缓人类衰老指标检测提供实验依据.