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目的:克隆表达乙型肝炎病毒DNA聚合酶(HBV-Pol)片段,建立乙型肝炎病人血清乙型肝炎病毒聚合酶抗体(抗-HBp)的间接酶联免疫吸附试验(间接ELISA)方法。
方法:采用限制性内切酶从含有HBV全长基因组的质粒上切下含HBV-Pol的编码序列,插入原核表达载体pQE30,表达并纯化目的蛋白,以其包被酶联板,用间接ELISA方法检测乙型肝炎病人血清中抗-HBp抗体。
结果:成功将HBV-ol插入原核表达载体pQE30,并且在大肠杆菌M15中获得了高效表达,表达产物以包涵体形式存在,以纯化的重组蛋白建立间接ELISA检测方法,检出乙肝病人血清中抗-HBp抗体,大三阳、小三阳和1、5阳性的乙肝病人血清中抗-HBp抗体阳性率分别为97.8%、57.9%和13.2%,平均阳性率为58.8%。
结论:成功地表达了(HBV-Pol)片段并且建立了血清抗-HBp抗体的检测方法,为进一步研究病人血清HBV-Pol抗体的血清学意义打下基础。