论文部分内容阅读
目的 探讨DNA修复蛋白RAD51对肿瘤射线敏感性的影响.方法 分别从组织和细胞水平检测RAD51在骨肉瘤中的表达及γ射线对RAD51表达水平的影响,并观测不同RAD51表达水平的骨肉瘤细胞株对γ射线敏感性的变化.采用RNA干扰技术,构建shRNA-Rad51载体.用MTT和克隆形成实验来研究不同干扰水平的骨肉瘤细胞株对γ射线的敏感性.用流式、Annexin Ⅴ-PITC/PI双染法和DNA ladder法来研究其对细胞周期和凋亡的影响.结果 RAD51蛋白在组织及细胞水平均呈高表达.8 Gyγ射线(剂量率0.79 Gy/分)照射后,RAD51表达水平在72 h内随着时间的延长而逐渐升高,并随着照射剂量的升高,RAD51的表达水平也逐渐升高.选用RAD51表达水平均增高但又有差异的三个骨肉瘤细胞系对其放射敏感性进行比较发现,随着RAD51表达水平的逐渐升高,各细胞系的IC50逐渐降低(73 Gy、38.8 Gy、25.3 Gy).成功构建并筛选出二个RAD51干扰的细胞株,MTT结果显示shRNA-A2、shRNA-F6细胞对射线敏感性变化显著(P<0.05),IC50由亲本细胞的73 Gy下降为26.1 Gy和40.1Gy,克隆形成实验也显示相同的趋势.16 Gyγ射线作用组,HOS-SHA2凋亡细胞比例(5.5%)明显高于对照细胞(1.1%)和亲本细胞(1.0%);HOS-shA2细胞对比阴性对照细胞和亲本细胞明显阻滞于细胞周期的G2/M期,G1期比例下降(P<0.01);而且G2/M期阻滞在射线作用情况下较未处理组更显著.结论:RAD51表达对γ射线作用具有时间和剂量依赖关系.RAD51蛋白可能通过影响细胞凋亡和细胞周期的方式,改变骨肉瘤对γ射线的敏感性.