【摘 要】
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目的 在大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)中构建含六价铬降解相关功能基因(ChrA)的重组菌株表达蛋白,初步分析重组蛋白的表达特性及其对六价铬的降解能力.方法 针对从六价铬降解菌Sporosarcina saromensis M52中筛选到的六价铬降解相关功能基因(ChrA),设计合成特异性引物,以M52基因组DNA为模板,PCR扩增后将该基因连接到载体pET-28a(+)
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目的 在大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)中构建含六价铬降解相关功能基因(ChrA)的重组菌株表达蛋白,初步分析重组蛋白的表达特性及其对六价铬的降解能力.方法 针对从六价铬降解菌Sporosarcina saromensis M52中筛选到的六价铬降解相关功能基因(ChrA),设计合成特异性引物,以M52基因组DNA为模板,PCR扩增后将该基因连接到载体pET-28a(+),并转化至大肠杆菌感受态细胞E.coli Trans5α中,提质粒后再转化至大肠杆菌感受态细胞E.coli BL21(DE3)中构建重组表达菌株.使用诱导剂IPTG对重组表达菌株进行诱导表达.将阳性重组菌液按1％接种量分别接种于初始六价铬浓度为50 mg/L、100 mg/L的LB液体培养基中,37℃振荡培养,分别在0h、12h、24 h、48 h取上清样品,采用二苯碳酰二肼分光光度法测定六价铬的浓度.结果 PCR扩增出长1 194bp的六价铬降解相关功能基因(ChrA),成功构建重组表达质粒pET-28a(+)-ChrA,经IPTG诱导(4 ～ 10)h后,在大肠杆菌中成功表达目的蛋白,分子量约为42.9 kD.重组菌株对50 mg/L和100 mg/L六价铬在不同时间内具有不同程度的降解效果,对100 mg/L六价铬的48 h降解率约为80％.结论 成功构建载舍六价铬降解相关功能基因ChrA的大肠杆菌重组抗性菌株,重组菌株经初步验证具有高效降解六价铬的活性,为含铬废水的微生物处理提供了资源,提示解决重金属污染治理的广阔应用前景.
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