【摘 要】
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目的：中药藤黄和同属植物中所含的藤黄酸及其类似物具有显著的抗肿瘤活性,其抗肿瘤机制的多样性也越来越受到关注.我们前期报道了云南藤黄来源的天然化合物oblongfolinC 具有显著的抗肿瘤活性的作用,但具体作用机制尚未明确,本课题将深入研究oblongfolinC 在抑制人肠肿瘤中的作用机制.方法：(1)应用Ettan 2D 蛋白质双向电泳系统,对oblongifolin C 处理前后的细胞裂解液
【机 构】
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上海中医药大学中药学院,上海201203;中药创新药物研发上海高校工程研究中心,上海201203
【出 处】
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中华中医药学会中药实验药理分会第十二次学术会议
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目的：中药藤黄和同属植物中所含的藤黄酸及其类似物具有显著的抗肿瘤活性,其抗肿瘤机制的多样性也越来越受到关注.我们前期报道了云南藤黄来源的天然化合物oblongfolinC 具有显著的抗肿瘤活性的作用,但具体作用机制尚未明确,本课题将深入研究oblongfolinC 在抑制人肠肿瘤中的作用机制.方法：(1)应用Ettan 2D 蛋白质双向电泳系统,对oblongifolin C 处理前后的细胞裂解液进行双向电泳,银染,扫描及数据处理,选取表达量差异超过3 倍的蛋白质点,进行质谱分析,运用二维蛋白质结合质谱分析找到oblongifolin C 的作用与内质网应激相关；(2)用荧光实时定量PCR 和western blot 进一步检验内质网应激表达量和蛋白质表达量；(3)用电子显微镜观察oblongifolin C 处理后内质网的亚结构；(4)用ER tracker 染色观察oblongifolin C 处理后内质网的变化；(5)用荧光实时定量PCR 检测细胞内miRNA 的变化.结果：为了对oblongifolin C 进行深入的机制研究,我们运用蛋白质组技术检测oblongifolin C 24 小时处理前后细胞蛋白质组的变化,二维蛋白质结合质谱显示oblongifolinC 调节了40 个蛋白质的表达量,IPA 软件分析发现oblongifolin C 诱导细胞死亡与内质网应激关系最为密切(p value 4.57E-04).我们进一步用荧光实时定量PCR 和western blot 进行验证,发现oblongifolin C 可以上调BIP,HSP90b1,CHOP,HYOU1,sXBP1 等未折叠蛋白相关蛋白,提示oblongifolin C 通过诱导内质网应激诱导细胞死亡.ER tracker 和电子显微镜结果也显示oblongifolin C 可以增加内质网应激.进一步研究发现,oblongifolin C 可以上调miRNA181a 和miRNA 1291 的表达,使用miRNA 181a 和miRNA 1291 的抑制剂可以有效逆转oblongifolin C 诱导的细胞死亡和内质网应激,提示oblongifolin C 通过上调miRNA 181a 和miRNA 1291,诱导内质网应激和细胞死亡.结论：云南藤黄来源的化合物oblongifolin C 可以通过上调miRNA 181a 和miRNA 1291,诱导内质网应激和细胞死亡,为抗肿瘤天然化合物的创新性研究提供理论基础.本研究还首次发现miRNA 181a 和miRNA 1291 可能在人肠癌细胞中诱导细胞死亡中起到重要的作用.
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