【摘 要】
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海洋动物共附微生物可分泌产生丰富的生物活性物质,为了探讨海胆共附菌DNC2蛋白的性质及其生物活性,应用DEAE-52阴离子交换柱层析和截留管对其进行分离,SDS-PAGE电泳检测
【机 构】
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大连海洋大学,辽宁大连116023
【出 处】
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第七届全国微生物资源学术暨国际微生物系统与分类学研讨会
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海洋动物共附微生物可分泌产生丰富的生物活性物质,为了探讨海胆共附菌DNC2蛋白的性质及其生物活性,应用DEAE-52阴离子交换柱层析和截留管对其进行分离,SDS-PAGE电泳检测分离组分蛋白,MALDI-TOF/TOF MS鉴定电泳条带,MTT法检测分离组分的肿瘤细胞抑制活性.结果海胆共附菌DNC2粗蛋白经DEAE-52阴离子交换层析分离出D1-D5共5种组分,组分D1经截留管进一步分离到组分D1-1(＞10 kDa)和D1-2(＜10 kDa)；SDS-PAGE电泳结果显示分离组分D1-1和D1-2均为单一条带,分子量分别约为30 kDa和5 kDa；组分D2共有分子量约为28、52、54、65、80、210kDa的6条带；D3共有分子量约为28、32、35、50 kDa4条带；D4共有分子量约为28、35、50、65、210 kDa 5条带；D5共有分子量约为28、35、54 kDa 3条带；MALDI-TOF/TOF MS鉴定结果三个条带与Uniprot微生物蛋白数据库得到匹配,与组分D1-1匹配的是枯草芽孢杆菌产生的核糖体大亚基假尿苷合成酶,与组分D3的第四条带(约28 kDa)和组分D5的第三条带(约28 kDa)匹配的是革兰氏阴性细菌Tropheryma whipplei(strain Twist)产生的50 S核糖体蛋白；肿瘤细胞抑制结果显示蛋白组分D1、D1-1、D4、D5对于人乳腺癌细胞(MDA-MB-231)有抑制作用且呈剂量依赖性,蛋白浓度为300 μg/mL时,抑制率分别达79.18％、54.87％、76.01％、52.77％,而D2对人乳腺癌细胞(MDA-MB-231)有抑制作用但剂量依赖不明显；蛋白组分D1、D1-1、D4、D5对于子宫颈癌细胞(RL95)同样有抑制作用且呈剂量依赖,D1、D1-1、D5浓度为300 μg/mL时,抑制率最高分别为50.19％、47.68％、67.10％,D4浓度为200 μg/mL时,抑制率最高为46.98％；蛋白组分D1、D1-1对于人肝癌细胞(HCC97H)有一定抑制性且呈剂量依赖,蛋白浓度为300 μg/mL时,抑制率分别为43.62％和33.95％,这些结果为海胆共附菌DNC2的开发利用提供了一定理论依据.
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