【摘 要】
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目的:筛选电离辐射敏感的线粒体DNA(mtDNA)缺失类型,并进行鉴定。 材料与方法:用10Gy60Co(射线照射正常人淋巴细胞细胞系,用2对引物的长PCR扩增照射前后样品的mtDNA基因组。
【出 处】
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中国环境诱变剂学会第13届学术交流会暨中国环境诱变剂学会青年学术交流会
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目的:筛选电离辐射敏感的线粒体DNA(mtDNA)缺失类型,并进行鉴定。
材料与方法:用10Gy60Co(射线照射正常人淋巴细胞细胞系,用2对引物的长PCR扩增照射前后样品的mtDNA基因组。发现可能缺失片段后用限制条件的普通PCR进行确认,并对PCR产物进行纯化、克隆、测序和核酸同源性(BLAST)分析。
结果:照射前的淋巴细胞系mtDNA样品只扩增出预期全长片段,照射后每对引物还扩增出可能为缺失造成的短片段;进一步限制条件的普通PCR 证实了mtDNA缺失的存在。PCR产物经纯化、克隆后测序进行BLAST分析表明两种mtDNA缺失分别为7455 bp(重链nt475-7929之间)、9225 bp(重链n17714-369之间)的mtDNA缺失,均发生在8bp正向重复序列之间。进一步的生物信息学检索得出两种mtDNA缺失为新发现的mtDNA缺失类型。
结论:电离辐射诱导出人淋巴细胞mtNDA 7455 bp和9225 bp缺失。
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