【摘 要】
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目的建立使用通用荧光引物分步PCR法筛选裸鼹鼠微卫星位点的方法。方法在特异性引物F链的5’端连接通用引物,先以特异引物R链和加长引物F链进行PCR,再加入通用荧光引物进行第
【机 构】
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第二军医大学实验动物中心; 第二军医大学教学保障处;
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目的建立使用通用荧光引物分步PCR法筛选裸鼹鼠微卫星位点的方法。方法在特异性引物F链的5’端连接通用引物,先以特异引物R链和加长引物F链进行PCR,再加入通用荧光引物进行第二步PCR,最后使用琼脂糖电泳和毛细管电泳检测扩增产物,同时以传统的荧光引物PCR为对照。结果琼脂糖电泳结果显示,通用荧光引物PCR产生的目的片段清晰,引物特异性强,目的片段多态性与传统PCR产生的多态性一致,且片段大小均比传统PCR产生的目的片段大15 bp左右,与预期一致。毛细管电泳结果也显示,通用引物PCR结果检测的等位基因数与传统荧光引物PCR方法产生的数量完全一致,无杂带,扩增效率高,具有较强的可操作性。结论使用通用荧光引物分步PCR法结果可应用于裸鼹鼠基因组大量微卫星位点的筛选。
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