【摘 要】
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目的本研究旨在探讨细胞内谷胱甘肽在肝毒性吡咯里西啶生物碱(Pyrrolizidine alkaloids,PAs)adonifoline(Adon), senecionine(Sene)以及monocrotaline (Mono)所造成人正常肝
【机 构】
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上海中药标准化研究中心; 中国药科大学生药研究室; 上海中医药大学中药研究所中药标准化教育部重点实验室;
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目的本研究旨在探讨细胞内谷胱甘肽在肝毒性吡咯里西啶生物碱(Pyrrolizidine alkaloids,PAs)adonifoline(Adon), senecionine(Sene)以及monocrotaline (Mono)所造成人正常肝细胞L02细胞生长抑制中的调控作用。方法以L02细胞为实验模型,采用DTNB法检测L02细胞分别与不同剂量Adon,Sene和Mono孵育24,48和72 h后,细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)与氧化型谷胱甘肽(GSSG)的比例。通过MTT和台盼蓝染色法检测L02细胞与BSO(L-Buthionine-S-R-Sulfoximine)预孵,清除细胞内GSH后,Adon,Sene和Mono对细胞存活率的影响,以及此条件下抗氧化剂如NAC(N-Acetyl-Cysteine)以及GSH对L02细胞的保护作用。RT-PCR检测L02细胞内三个重要的P450酶:CYP1A1,CYP2E1和CYP3A4的表达。结果L02细胞分别与不同剂量Adon,Sene和Mono孵育24,48和72h后,细胞内GSH/GSSG明显降低并呈时间和剂量依赖性。L02细胞与10 M BSO预孵24 h后,Adon,Sene和Mono能够显著降低细胞存活率。而延长PAs的孵育时间发现PAs对L02细胞表现出明显的细胞毒性。进一步实验发现NAC以及GSH能够缓解BSO预孵后,PAs所造成的细胞毒作用。同时L02细胞内存在CYP1A1,CYP2E1的表达,而没有CYP3A4的表达。结论细胞内代谢酶的缺失可能是造成PAs对L02细胞毒性较小,毒性产生时间长的原因之一,而GSH在PAs的细胞生长抑制中发挥重要作用。
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