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本研究提取牛源犬新孢子虫基因组DNA，应用PCR技术扩增犬新孢子虫表面蛋白基因NcSRS2和致密颗粒蛋白基因NcGRA7，SOE-PCR技术拼接NcSRS2和NcGRA7基因，构建重组克隆质粒pMD18-NcSRS2-NcGRA7、重组腺病毒穿梭质粒pCR259-NcSRS2.NcGRA7及重组腺病毒表达质粒Transpose-Ad-NcSRS2-NcGRA7，脂质体介导转染QBI-HEK293细胞，包装重组腺病毒Ad5-NcSRS2-NcGRA7，PCR检测重组腺病毒NcSRS2-NcGRA7融合基因，IFAT和Western blotting检测NcSRS2-NcGRA7融合基因在QBI-HEK293细胞中的表达，TCID50法测定病毒滴度后，接种BALB／c小鼠，间接ELISA检Nd,鼠血清IgG抗体水平，细胞因子ELISA试剂盒检测小鼠血清IFN-γ、IL-4水平。结果，拼接的牛源犬新孢子虫NcSRS2-NcGRA7融合基因大小为1463bp，与GenBank中发表的序列(AF061249、AF176649)同源性为99％；重组腺病毒Ad5-NcSRS2-NcGRA7在QBI-HEK293细胞中包装成功，表达融合蛋白的分子量约为51ku，具有较好的反应原性；测得重组腺病毒Ad5-NcSRS2-NcGRA7滴度为109TCID50／mL；ELISA检测三免后3周的BALB／c小鼠血清中IgG抗体效价达1：4096，细胞因子IFN-γ、IL-4水平与对照组比较差异极显著(p<0.01)。本研究为牛源犬新孢子虫NcSRS2-NcGRA7融合基因重组腺病毒载体疫苗的研制奠定了基础。