碱性木聚糖酶在毕赤酵母中高效表达体系的构建及其机理研究

来源 :第三届全国酶制剂研究开发应用技术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ndspsp
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  本研究基于毕赤酵母基因组、转录组以及蛋白质等组学技术研究的基础,采用密码子优化技术,增加基因剂量以及分泌途径改造技术实现规模化,在毕赤酵母中高效表达应用于纸浆漂白的耐热耐碱性木聚糖酶,同时,通过iTR.AQ(isobaric tags for relativeand absolute quantification)方法从蛋白质组学研究了与分泌途径相关的关键蛋白。主要研究结果如下:(1)本实验通过全基因合成法获得了经密码子优化的Bcillushalodurans S7内切木聚糖酶基因,通过串联表达盒方法构建得到一个四拷贝的菌株,在此基础上过量表达了与分泌途径相关的一个蛋白,最终构建得到高效分泌表达木聚糖酶的工程菌。在2L发酵罐中,甲醇诱导120h,以桦木木聚糖为底物,发酵上清酶活最大可达到3361 U/mL,发酵上清总蛋白最大可大5.2g/L。(2)研究表明:重组木聚糖酶最适温度为70℃,最适pH值为9.0,并显示出较好的热稳定性和宽pH适应性,符合在纸浆漂白中的应用。(3)从蛋白质组学分析外源蛋白在毕赤酵母中高效表达的关键蛋白,通过iTRAQ蛋白质定量分析该重组菌,精确定量获得了毕赤酵母中胞内表达的1161个蛋白,得到了与蛋白质分泌途径相关的关键蛋白。
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