近年来在我国境内出现了高致病性猪蓝耳病,较以往相比,该病的病原——高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的致病力显著增强,对机体的病理损伤也要严重得多。然而目前对于PRRSV的分子致病机制还知之甚少。一般而言,病毒感染宿主靶细胞后可以引起细胞内某些基因的非正常转录与表达,而分析这些差异转录与表达的基因将有助于了解病毒的致病机制。为鉴定PRRSV感染后宿主靶细胞猪肺泡巨噬细胞(PAM)内转录发生上调或下调的基因,本研究运用抑制性消减杂交技术,以PRRSV感染后的PAM细胞为实验方,以PRRSV感染前的细胞为对照方进行消减杂交,得到了PRRSV感染后PAM内部转录后发生上调的基因。以PRRSV感染前的细胞为实验方,以PRRSV感染后的细胞为对照方进行消减杂交,得到了PRRSV感染后PAM内部转录后发生下调的基因。将两种杂交所得的转录差异基因经PCR扩增后分别克隆到T载体中并转化到大肠杆菌感受态细胞内,得到PRRSV感染后猪肺泡巨噬细胞内差异转录基因文库。随机挑取文库中的几十个克隆用PCR方法进行鉴定,结果表明该差异文库有较好的复杂多样性,能够满足下一步的文库测定与基因序列分析。文库构建过程中,我们对每一步都做了验证分析,以确保差异转录的基因得到特异性的突出显示。本研究通过构建高致病性PRRSV感染后猪肺泡巨噬细胞内差异转录基因文库来筛选得到在病毒感染后PAM细胞内上调或下调的基因,并分析差异基因和蛋白在感染和致病过程中的调控作用,从而为PRRSV分子致病机制提供新的思路和线索。