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用人工合成的无色孔雀石绿-兔血清白蛋白(LMG-RSA)作抗原免疫BALB/c小鼠，通过杂交瘤细胞融合技术筛选抗无色孔雀石绿的单抗，单抗经纯化后对其特异性和灵敏性进行了鉴定，探讨了建立孔雀石绿的免疫学检测方法。结果显示，经细胞融合和筛选得到了1株分泌抗无色孔雀石绿单克隆抗体的杂交瘤细胞5E9。经鉴定，该杂交瘤细胞的染色体数为98.82±5.6，间接ELISA检测小鼠腹水的抗体效价达1.3×105，该细胞连续培养10代以上，生物学性状稳定，间接竞争ELISA(ciELISA)结果显示，无色孔雀石绿50[％]抑制的质量浓度为18.5 μg/L，除孔雀石绿外，与其他类似结构和相关类型的药物没有交叉反应，表明该单抗用于孔雀石绿的检测有较大的应用价值。