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目的 替莫唑胺(TMZ)耐药是导致临床治疗失败的重要原因,寻找参与耐药的调控因子及临床逆转分子靶标,成为亟待解决的问题。本研究旨在明确长链非编码RNA SOX2OT 参与TMZ 耐药进程,并探讨m6A 去甲基化酶ALKBH5 介导SOX2OT 调控SOX2 表达在胶质瘤TMZ 耐药中的作用及潜在机制;方法 通过体外渐次增加培养基中TMZ 浓度构建耐药细胞株U87TR 与U251TR,经LncRNA 表达谱分析筛选差异出高表达SOX2OT 及生信分析预测其靶基因SOX2;应用CCK8 法与流式细胞术检测沉默SOX2OT 后耐药细胞株对TMZ 敏感性及细胞增殖与凋亡的变化情况;FSIH 实验分析SOX2OT 亚细胞定位;采用Pulldown 及RIP 技术验证SOX2OT 与ALKBH5 蛋白结合情况;应用CHIP 与EMSA、MeRIP 技术分别分析ALKBH5 与SOX2 的启动子区域结合情况及甲基化区域m6A 修饰水平变化;应用m6A 定量法检测沉默ALKBH5 后耐药细胞SOX2 的m6A 修饰水平改变;结果 CCK8 与流式结果显示sh-SOX2OT 显著增强耐药细胞对TMZ 敏感性,细胞凋亡率增加,进一步功能回复实验证实SOX2OT 调控SOX2 参与耐药进程;FISH 实验表明SOX2OT 在胞质与胞核中均丰富表达,并且Pulldown 与RIP 实验证实核内定位的ALKBH5 与SOX2OT 相互结合;CHIP 结果还证实ALKBH5 与SOX2 启动子区域结合促进SOX2 转录表达,同时MeRIP 结果表明ALKBH5 催化SOX2 的m6A去甲基化修饰,m6A 定量结果显示沉默ALKBH5 后耐药细胞m6A 修饰水平明显增加,SOX2 表达量增加。