目的 替莫唑胺(TMZ)耐药是导致临床治疗失败的重要原因,寻找参与耐药的调控因子及临床逆转分子靶标,成为亟待解决的问题。本研究旨在明确长链非编码RNA SOX2OT 参与TMZ 耐药进程,并探讨m6A 去甲基化酶ALKBH5 介导SOX2OT 调控SOX2 表达在胶质瘤TMZ 耐药中的作用及潜在机制；方法 通过体外渐次增加培养基中TMZ 浓度构建耐药细胞株U87TR 与U251TR，经LncRNA 表达谱分析筛选差异出高表达SOX2OT 及生信分析预测其靶基因SOX2；应用CCK8 法与流式细胞术检测沉默SOX2OT 后耐药细胞株对TMZ 敏感性及细胞增殖与凋亡的变化情况；FSIH 实验分析SOX2OT 亚细胞定位；采用Pulldown 及RIP 技术验证SOX2OT 与ALKBH5 蛋白结合情况；应用CHIP 与EMSA、MeRIP 技术分别分析ALKBH5 与SOX2 的启动子区域结合情况及甲基化区域m6A 修饰水平变化；应用m6A 定量法检测沉默ALKBH5 后耐药细胞SOX2 的m6A 修饰水平改变；结果 CCK8 与流式结果显示sh-SOX2OT 显著增强耐药细胞对TMZ 敏感性，细胞凋亡率增加，进一步功能回复实验证实SOX2OT 调控SOX2 参与耐药进程；FISH 实验表明SOX2OT 在胞质与胞核中均丰富表达，并且Pulldown 与RIP 实验证实核内定位的ALKBH5 与SOX2OT 相互结合；CHIP 结果还证实ALKBH5 与SOX2 启动子区域结合促进SOX2 转录表达，同时MeRIP 结果表明ALKBH5 催化SOX2 的m6A去甲基化修饰，m6A 定量结果显示沉默ALKBH5 后耐药细胞m6A 修饰水平明显增加，SOX2 表达量增加。