兔出血症病毒RT-PCR检测方法的建立及应用

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按照 GenBank 上公布的兔出血症病毒(RHDV)基因序列设计1对引物,以 RHDV 发病兔的新鲜肝为材料,提取总 RNA,进行 cDNA 的合成和 PCR 扩增,结果能扩增出与预期的269 bp 大小一致的片段, 该产物序列与公布的 RHDV 基因序列同源性95.8%~98.5%。该方法可以特异性地检测出 RHDV,其最小检出 RHDV 的 RNA 浓度为1.66 ng/μL,敏感性为 HA 的4×10~4倍,表明已成功建立了 RHDV RT-PCR 检测方法。用该方法和血凝实验(HA)对兔出血症发病兔各组织脏器进行检测,结果表明,在检测发病死亡兔各脏器中,HA 检测阳性的病料为肝脏、肾脏、脾脏、血液和肺,而 RT-PCR 检测除粪便外,其它均为阳性;该方法还能够检测出-20℃保存12个月的阳性病料。表明 RT-PCR 方法检测 RHDV 特异性强、敏感度高、重复性好,不仅可用于 RHD 临床诊断和流行病学调查,而且在兔肉等兔类产品的检疫方面具有很好的应用前景。
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