【摘 要】
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钙网织蛋白(Calreticulin,CRT)具有多种生物学功能.在动物寄生线虫中,其通过参与寄生线虫取食、修饰寄主免疫系统等途径来辅助线虫对动物的侵染.在植物寄生线虫南方根结
【机 构】
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中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室,北京100193
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钙网织蛋白(Calreticulin,CRT)具有多种生物学功能.在动物寄生线虫中,其通过参与寄生线虫取食、修饰寄主免疫系统等途径来辅助线虫对动物的侵染.在植物寄生线虫南方根结线虫Meloidogyne incogntia侵染拟南芥及番茄的过程中,CRT由其侧腹食道腺腹合成并分泌于根部组织内,但该蛋白的生物学功能仍不清楚.本研究中,通过对来自不同物种中的11个CRTs蛋白序列进行序列比对分析发现,IDCGGGY和DGEWEPP为CRTs的2个保守序列.根据此保守序列分别设计出简并引物CAF和CAR.利用此简并引物从马铃薯腐茎线虫Ditylenchus destructor中克隆出1个CRT基因Dd-crt-1(GenBank登录号：GQ396798).其cDNA全长1 552 bp,含有一个由1 215 bp组成的开放性阅读框(ORF),编码404个氨基酸残基,编码蛋白分子量为46.9 KDa.Dd-crt-1与美洲板口线虫Necator americanus CRT基因(GenBank登录号：CAA07254)高度同源,一致性(identities)达到83％.Dd-crt-1 5端和3端分别含有一个大小为58 bp和279 bp的非编码区.内含子外显子结构分析显示,Dd-crt-1含有8个内含子,且内含子两端序列遵守GU/AG规则.信号肽预测显示,Dd-crt-1氨基端含有一个由16个氨基酸残基组成的信号肽,这表明Dd-crt-1属于分泌型蛋白,据此推测马铃薯腐烂茎线虫可能在侵染寄主的过程中将Dd-crt-1分泌至根部组织内协助其侵染.系统发育分析结果显示,来自线虫、植物和真菌中的CRTs基因分别形成3个独立的进化分支,由此可见,Dd-crt-1并非通过基因水平转移从真菌中获得.
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