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目的:通过大样本临床研究结合表型分析,阐明我国慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染患者HBV逆转录酶(RT)区rtA181S变异的临床发生特点、病毒学特点及临床意义.
方法:研究样本来自2007.07-2013.03在解放军第302医院救治的18419例慢性HBV感染患者,用巢式PCR法扩增HBV全长RT基因,直接测序法检测病毒耐药变异和基因型,克隆测序法进行证实并分析各种变异株在准种中的比例,重点对HBV rtA181S变异进行分析.从典型病例样本中克隆各种含有rtA181S变异的病毒基因,构建具有复制能力的变异型和野生型重组质粒转染HepG2细胞,在含或不含梯度稀释核苷(酸)类似物的培养液中培养.定量细胞内HBV复制中间体,并计算50％有效药物浓度(EC50),检测病毒复制力和耐药性.
结果:共98例患者检测到含rtA181S变异的12种变异模式.rtA181S变异阳性患者中,C基因型和B基因型HBV感染者分别占91.8％和8.2％;相比之下,rtA181S未变异患者C基因型和B基因型HBV分别为84.6％和15.4％(P＜0.01).rtA181S变异的患者均曾接受核苷(酸)类似物治疗,且多伴随病毒学突破.表型分析显示临床分离株rtA181S、rtA181S +N236T、rtN236T和rtA181V的复制力是野生株复制力的68.5％、49.9％、71.4％和66.2％,其对阿德福韦酯的EC50值分别上升了3.7、 9.8、7.9和5.4倍.rtA181S变异株仍对拉米夫定、恩替卡韦和替诺福韦敏感,定点消除该突变后的相应野生株对阿德福韦酯的敏感性得到恢复.临床实践中,单用或联用恩替卡韦对rtA181S变异引起的阿德福韦酯失败患者实施挽救治疗的疗效显著,患者HBV DNA均达到检测不到水平(＜100 IU/ml).
结论:rtA181S变异对阿德福韦酯中度耐药,该变异可由拉米夫定或阿德福韦酯诱发,能引起阿德福韦酯治疗失败,临床用核苷类药物恩替卡韦挽救治疗有显著疗效.研究有助于加深临床对HBV耐药及耐药管理的新认识.