【摘 要】
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利用生物学软件分析GCRVS11基因,设计针对S11基因不同位置的小发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰序列,并将这些序列片段克隆到干扰载体pGpU6中,构建出4个shRNA干扰载体pGpU6S11-67、pGpU6S11-89、pGpU6S11-327和pGpU6S11-435.用脂质体转染法分别将4种shRNA干扰载体和pCDNA-NS26共转染入草鱼肾脏细胞(CI
【机 构】
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上海海洋大学,国家水生动物病原库,上海,201306
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利用生物学软件分析GCRVS11基因,设计针对S11基因不同位置的小发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰序列,并将这些序列片段克隆到干扰载体pGpU6中,构建出4个shRNA干扰载体pGpU6S11-67、pGpU6S11-89、pGpU6S11-327和pGpU6S11-435.用脂质体转染法分别将4种shRNA干扰载体和pCDNA-NS26共转染入草鱼肾脏细胞(CIK),24h后利用western blot检测NS26蛋白的表达量；分别转染4种shRNA干扰载体6h后,感染GCRV病毒,24h后检测NS26表达量,并检测GCRV的复制效率.研究结果表明,shRNA与pCDNA-NS26共转后,与NC组相比,pGpU6S11-327组中NS26表达量降低,pGpU6S11-67、pGpU6S11-89和pGpU6S11-435组中NS26表达量无明显差异；攻毒实验中,与NC组相比,pZNS26-327组中NS26表达量降低,pGpU6S11-67、pGpU6S11-89和pGpU6S11-435组中NS26表达量无明显差异,而pGpU6S11-327组中GCRV复制效率降低,pZNS26-89、pZNS26-327和pZNS26-435组中GCRV复制效率无明显差异.本研究成功的构建了能够干扰GCRVS11基因的shRNA载体,发现pGpU6S11-327能够抑制GCRV的复制,为进一步运用RNA干扰技术进行S11基因的功能研究奠定了基础.
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