[目的]对菌株Pseudoalteromonas sp.ASY5产κ-卡拉胶酶的发酵工艺进行中试放大实验；κ-卡拉胶酶经纯化后对其进行生物信息学分析.[方法]对产κ-卡拉胶酶的发酵工艺进行了7L、20L、200 L的中试放大实验；通过硫酸铵沉淀、离子交换层析、凝胶过滤层析、SDS-PAGE对κ-卡拉胶酶进行分离纯化并对得到的纯酶进行质谱分析；采用NCBI、Expasy、Motif scan等多种在线生物软件对κ-卡拉胶酶蛋白基因进行生物信息学分析.[结果]发酵放大后,7L、20 L和200 L罐上发酵产酶规律与摇瓶发酵基本一致,其酶活力最高分别为4428 U/mL、2700 U/mL、918 U/mL；κ-卡拉胶酶纯化后在SDS-PAGE凝胶上得到单一的条带；基于蛋白质的氨基酸序列从蛋白质的理化性质、亲(疏)水性、跨膜区、信号肽、细胞定位、二级结构、结构域和功能域等方面进行生物信息学分析.[结论]随发酵工艺放大κ-卡拉胶酶活呈下降趋势,但依然保持较高的酶活力；生物信息学分析为阐明κ-卡拉胶酶的蛋白结构及作用机理提供了理论基础.