人脐带间充质干细胞重复多次静脉注射在猴体内组织分布及免疫反应

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目的:观察静脉注射人脐带间充质干细胞(hUC-MSC)在猴体内组织分布及宿主的免疫反应情况,为其临床试验和临床应用提供相关资料。方法:选择30只3岁-5岁普通级别的健康合格食蟹猴,按体重、性别随机分为正常对照组(CN组)、hUC-MSC静脉注射低剂量组(TA组)和hUC-MSC静脉注射高剂量组(TB组),每组10只动物,雌雄各半。其中TA、TB组静脉注射给予hUC-MSC,剂量分别为1.0×10~6个细胞/kg、5.0×10~6个细胞/kg;CN组静脉注射等体积的氯化钠注射液。三组均注射给药5次,两次给药之间间隔1周。分别在给药前第2周、给药前第1周、末次给药结束、恢复期结束时,采集血液样品,用流式法测定血液中的CD3~+、CD4~+、CD8~+T细胞亚群,并计算CD4~+/CD8~+比值;分别在给药前、末次给药结束、恢复期结束时,采集样品测定血清中的IL-2、IL4、IFN-γ和TNF-α,以检测猴体内免疫因子水平;分别于末次给药结束、恢复期结束时,采集血液、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胸腺、子宫、睾丸等组织,采用免疫荧光法检测hUC-MSC在食蟹猴体内的组织分布、清除情况。结果:末次给药结束和恢复期结束时,TA和TB组静脉注射后30min内,在血液中仍能检测到干细胞;注射后30min至7天内在肺脏能检测到干细胞;注射后3天在肝脏、脾脏能检测到干细胞,7天后未能检测到。末次给药结束,TA组和TB组CD3~+(%)显著性低于CN组(P<0.05),TB组的IFN-γ明显高于TA组和CN组(P<0.05),但三组均值均在正常范围内,组间差异无生物学意义。其它指标各组均值无显著性差异。结论:静脉注射hUC-MSC给予食蟹猴,最高剂量采用5.0×10~6个细胞/kg (人的体重按60kg计算),给药5次,两次给药之间间隔1周,不会引起宿主的免疫反应;在本实验的组织分布研究中,在注射后7天肺脏、肝脏、脾脏干细胞已未能检测到,但是否已被完全清除,有待用更灵敏的检测方法进一步研究。
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