TSA处理供体细胞对水牛体细胞核移植胚胎体外发育能力的影响

来源 :中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十四届学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:adamsilei
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
在体细胞克隆技术中,基因的正常表达是胚胎发育的关键,克隆胚胎基因组的不完全重编程是克隆动物成功率低的主要原因。而组蛋白乙酰化修饰又在不同层次上影响各种基因的表达。本研究主要探讨不同浓度的去乙酰化抑制剂曲古抑菌素A(Trictiostatin A,TSA)分别处理培养供体细胞不同时间对水牛体细胞核移植重构胚体外发育的影响。体外成熟培养22~24h的水牛卵母细胞,放入含有5μg/ml细胞松弛素的操作液中,在装有spindle view系统的显微操作仪下进行去核。水牛耳部成纤维细胞传代至第五代,在细胞长至75%汇合时,采用不同浓度的TSA(0.15、0_3、0.6和1.2μM)分别处理细胞24、48和72 h作为供体细胞,经核移植和电融合后构建核移植重构胚。重构胚经5μM离子霉素激活处理5min并在2mM的6-DMAP中培养3h后,在含有颗粒细胞单层细胞的微滴中(30μ1)培养7~9天,观察其卵裂和胚胎发育情况。结果显示:在细胞培养液中分别添加终浓度为0.15、0.3、0.6和1.2μM的TSA分别处理供体细胞24h、48h和72h时,核移植胚胎的发育率呈规律性变化,其中以0.15μMTSA处理72h、0.3 μM TSA处理48h,0.6 μM TSA处理24h的细胞作为供体细胞时,各组间重构胚的囊胚发育率均显著高于对照组(分别为30.O%、30.8%、30.3%vs 19.0%,p<0.05),当TSA处理浓度增加到1.2u M时,发现核移植胚胎的卵裂率和囊胚率随着TSA处理时间的升高而逐渐下降,当处理时间是72h时,重构胚的卵裂率显著低于对照组(52.2%vs 70.2%,p<0.05),但囊胚发育率与对照组差异不显著(11.6%vs 19.0%,p>0.05)。结果表明:TSA处理供体细胞对水牛体细胞核移植胚胎发育能力的影响呈时间和浓度的依赖性,适宜浓度的TSA培养处理水牛成纤维细胞一定时间可提高其核移植后胚胎的发育能力。
其他文献
本文概述了原核注射法,精子介导法、逆转录病毒感染法和体细胞核移植法转基因猪技术的建立和发展历程;对转基因猪的遗传稳定性也进行了讨论。并根据国内外发展的态势和我国养
尽管许多哺乳动物都已被成功克隆,但克隆效率非常低,仅有低于5%的重组胚胎可以发育成个体,再克隆的效率则更低。体细胞克隆效率低主要体现在克隆胚胎质量差(与正常胚胎相比细胞数
会议
以屠宰母牛卵巢为实验材料,对卵巢表面直径2mm以下腔前卵泡卵母细胞的体外成熟(IVM)、体外受精(IVF)和受精卵的体外培养(IVC)进行了系统研究。结果显示:腔前卵泡卵母细胞成熟率
会议
本试验研究了不同FSH来源、羔羊日龄、重复超排、受精液pH、精卵共孵育时间对羔山羊超排效果及卵母细胞体外受精效果的影响。结果表明:用日本产FSH对30-50日龄羔羊进行超排处
水牛分布在世界的129个围家和地区,尤其对南亚和东南亚地区的农村经济做出了很大的贡献。水牛的生理特点是初情期推迟,初产年龄长,产后久不发情,长的产犊间隔和受胎率低。为了解
会议
在牛胚胎的体外产业化生产中,由于活体采卵、单个体系谱胚胎生产等技术的应用,需要有效的少量卵母细胞体外成熟培养系统支持。另外,由于每对卵巢能回收到的卵母细胞数差异较大,当
〔目的〕掌握进口食品中合成色素的基本情况。[方法] 对1996年~1999年深圳各口岸抽检的进口食品2912份进行了合成色素的检测分析。[结果] 有453份不合格,占14.9%。不合格率呈逐
本研究通过对不同卵巢状况的成年水牛腔前卵泡采集数量进行统计分析,探讨卵巢直径大小及表面可见卵泡分布状况与腔前卵泡采集数量的关系,以期在腔前卵泡采集前对卵巢进行预选择
会议
养老金计划的成本主要包括养老金经济成本和养老金计划的管理成本。在养老金经济成本一定的情况下,养老金计划总成本的大小就主要取决于养老金计划的管理成本。20世纪90年代
牛体外受精胚胎在8~16细胞期出现发育阻滞现象。目前,克服阻滞现象有助于产生高质量的桑葚胚或囊胚胚,主要采用以下方法:一是与体细胞(卵丘细胞、颗粒细胞)或体细胞液共同培养;二