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在体细胞克隆技术中,基因的正常表达是胚胎发育的关键,克隆胚胎基因组的不完全重编程是克隆动物成功率低的主要原因。而组蛋白乙酰化修饰又在不同层次上影响各种基因的表达。本研究主要探讨不同浓度的去乙酰化抑制剂曲古抑菌素A(Trictiostatin A,TSA)分别处理培养供体细胞不同时间对水牛体细胞核移植重构胚体外发育的影响。体外成熟培养22~24h的水牛卵母细胞,放入含有5μg/ml细胞松弛素的操作液中,在装有spindle view系统的显微操作仪下进行去核。水牛耳部成纤维细胞传代至第五代,在细胞长至75%汇合时,采用不同浓度的TSA(0.15、0_3、0.6和1.2μM)分别处理细胞24、48和72 h作为供体细胞,经核移植和电融合后构建核移植重构胚。重构胚经5μM离子霉素激活处理5min并在2mM的6-DMAP中培养3h后,在含有颗粒细胞单层细胞的微滴中(30μ1)培养7~9天,观察其卵裂和胚胎发育情况。结果显示:在细胞培养液中分别添加终浓度为0.15、0.3、0.6和1.2μM的TSA分别处理供体细胞24h、48h和72h时,核移植胚胎的发育率呈规律性变化,其中以0.15μMTSA处理72h、0.3 μM TSA处理48h,0.6 μM TSA处理24h的细胞作为供体细胞时,各组间重构胚的囊胚发育率均显著高于对照组(分别为30.O%、30.8%、30.3%vs 19.0%,p<0.05),当TSA处理浓度增加到1.2u M时,发现核移植胚胎的卵裂率和囊胚率随着TSA处理时间的升高而逐渐下降,当处理时间是72h时,重构胚的卵裂率显著低于对照组(52.2%vs 70.2%,p<0.05),但囊胚发育率与对照组差异不显著(11.6%vs 19.0%,p>0.05)。结果表明:TSA处理供体细胞对水牛体细胞核移植胚胎发育能力的影响呈时间和浓度的依赖性,适宜浓度的TSA培养处理水牛成纤维细胞一定时间可提高其核移植后胚胎的发育能力。