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目的 构建结核分枝杆菌Rv1419 DNA疫苗及其蛋白,并通过小鼠实验来评价其免疫学特性.方法 以H37Rv基因组为模板,PCR扩增rv1419基因,插入pGEM-T载体中,经酶切鉴定与序列测定证实后,再与真核表达载体pVAX1或原核表达载体pET30a-setb连接,构建Rv1419 DNA疫苗及其蛋白.50只BALB/c小鼠随机分为5组,分别为生理盐水组、pVAX1载体组、微卡菌苗组、Ag85A DNA疫苗组和Rv1419 DNA疫苗组,以研究Rv1419 DNA的免疫原性.20只小鼠随机分为2组,分别为完全弗氏佐剂组、完全弗氏佐剂+rRv1419蛋白组,每2周肌肉注射1次,共3次,以研究Rv1419重组蛋白的免疫原性.第3次免疫后3周杀死小鼠,通过ELISA方法检测小鼠血清中抗Rv1419的IgG抗体；用ELISA法检测小鼠脾细胞培养上清中IFN-γ和IL-4的表达水平；应用流式细胞术检测全血单个核细胞内分泌IFNγ的Th1和IL-4的Th2细胞百分比以及Th1/Th2比值.结果 PCR扩增获得长401 bp和408 bp的rv1419基因片段；重组真核表达质粒pVAX1-Rv1419和原核表达质粒pET30a-setB-Rv 1419经菌落PCR、双酶切和DNA测序证明构建成功.小鼠特异性抗体IgG,Rv1419 DNA疫苗组显著高于生理盐水组和pVAX1载体组(P＜0.05),与微卡菌苗组无显著性差异；完全弗氏佐剂+rRv1419蛋白组也显著高于完全佐剂组(P＜0.01).IFN-γ水平,Rv1419 DNA疫苗组显著高于生理盐水组、pVAX1载体组和微卡菌苗组(P＜0.05),低于Ag85A DNA疫苗组,但差异无统计学意义；完全弗氏佐剂+rRv1419蛋白组高于完全佐剂组,但差异无统计学意义.Th1细胞百分比和Th 1/Th2细胞比值,Rv1419 DNA疫苗组显著高于生理盐水组、pVAX1载体组(P＜0.01),但与微卡菌苗组和Ag85A DNA疫苗组差异无统计学意义；完全弗氏佐剂+rRv 1419蛋白组Th1细胞百分比高于完全佐剂组,而Th 1/Th2细胞比值低于完全佐剂组,但差异无统计学意义.结论 成功构建了结核分枝杆菌DNA疫苗和原核表达质粒pET30a-setB-Rv 1419,Rv1419 DNA疫苗有较强的免疫原性,和Rv1419重组蛋白一样可以诱导体液免疫,但主要刺激Th1型细胞介导的免疫应答.