【摘 要】
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目的：对马尔尼菲青霉外分泌性酸性蛋白酶进行分离、纯化及鉴定.方法：①将马尔尼菲青霉B-6323株菌接种在pH4.0,以牛血红蛋白为底物的酵母碳基液基中进行蛋白酶诱导培养.②运
【机 构】
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四川大学华西医院皮肤科,四川省成都市610041
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目的：对马尔尼菲青霉外分泌性酸性蛋白酶进行分离、纯化及鉴定.方法：①将马尔尼菲青霉B-6323株菌接种在pH4.0,以牛血红蛋白为底物的酵母碳基液基中进行蛋白酶诱导培养.②运用双向凝胶电泳(2D SDS-PAGE)技术对马尔尼菲青霉蛋白酶诱导培养上清液中蛋白成分进行分离.③运用Q-TOF Premier质谱仪分析双向凝胶电泳上蛋白位点的肽图谱,获得的混合物肽片段的一级图谱和二级碎片数据,通过仪器自带的Proteinlynx2.25软件搜索产生pkl文件,然后再将pkl数据文件通过Mascot搜索引擎进行检索.结果①通过双向凝胶电泳分离出14个蛋白质位点,建立了马尔尼菲青霉蛋白酶诱导培养上清液双向凝胶电泳图谱.②通过质谱技术鉴定出两个蛋白酶位点,分别为分子量为39693的天冬氨酰蛋白酶(aspartyl protease)及分子量为28359的aspergillopepsin-2 precursor,均为酸性蛋白酶,种属为马尔尼菲青霉.结论：发现了马尔尼菲青霉分泌型天冬氨酰蛋白酶(aspartyl protease)及分泌型Aspergillopepsin-2.
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