【摘 要】
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目的 树突状细胞(Dendritic cells,DCs)在机体抗分枝杆菌免疫应答中发挥关键作用,但是由于数量稀少、制备困难等原因,不同亚型DCs在分枝杆菌免疫应答中的功能了解相对较少.本研究通过小鼠Flt3配体(Flt3 ligand,FL)诱导制备FL-cDC和-pDC亚型,对其在BCG体外感染早期的免疫应答特性进行分析,以期增加对不同亚型DC在分枝杆菌免疫应答中的作用的了解.方法 使用FL蛋
【机 构】
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扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室/江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心,扬州225009
【出 处】
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21世纪第五届全国人兽共患病学术研讨会
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目的 树突状细胞(Dendritic cells,DCs)在机体抗分枝杆菌免疫应答中发挥关键作用,但是由于数量稀少、制备困难等原因,不同亚型DCs在分枝杆菌免疫应答中的功能了解相对较少.本研究通过小鼠Flt3配体(Flt3 ligand,FL)诱导制备FL-cDC和-pDC亚型,对其在BCG体外感染早期的免疫应答特性进行分析,以期增加对不同亚型DC在分枝杆菌免疫应答中的作用的了解.方法 使用FL蛋白体外诱导小鼠骨髓源造血干细胞,流式细胞术(Flow cytometry, FCM)分析其表型并分选FL-cDC和-pDC,经rBCG-GFP体外感染后分析两种DC亚型在细胞感染率、活化成熟、细胞因子分泌和特异性抗原提呈等方面异同.结果 感染后通过激光共聚焦显微镜可以在小部分FL-cDC和-pDC胞内观察到BCG菌体,但是大部分细胞中并没有细菌存在;FCM分析显示两种DC亚型的GFP阳性率较低(约6％),说明两种DC亚型的感染水平均较低,但是不同剂量BCG感染后只有FL-cDC感染率显著增加,显示FL-pDC亚型更易达到饱和感染状态.绝大部分FL-cDC和-pDC在感染后4h即表达高水平的CD40、CD80、CD86和MHC-Ⅱ类分子,且在感染后12 h达到最高峰,显示两种DC亚型均能高效活化成熟,但是FL-pDC的活化效率明显弱于FL-cDC.细胞因子表达谱分析显示,两种DC亚型在感染早期均表达高水平的IL-6和TNF-α,其中FL-pDC中两种细胞因子的表达均早于并显著高于FL-cDC,显示pDC亚型的BCG感染的应答更迅速.体外抗原提呈试验显示,FL-cDC和-pDC亚型均能特异性提呈分枝杆菌相关抗原Ag85A,且负载抗原12h处的提呈能力最强,但是FL-pDC的抗原提呈能力在整个过程中均弱于FL-cDC,表明后者在抗原提呈过程中发挥更重要的作用.结论 以上结果表明FL-cDC和-pDC亚型均广泛参与机体抗分枝杆菌免疫应答,包括识别并吞噬BCG,细胞有效活化成熟,抗原提呈以及分泌IL-6和TNF-α参与免疫应答调节;同时,相比FL-cDC亚型,FL-pDC的活化成熟效率和抗原提呈能力相对较低,更倾向于通过分泌大量前炎性细胞因子的方式在感染早期发挥重要的免疫调节功能.
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