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目的：构建5种不同类型的表达结核杆菌特异抗原的重组亚牛痘病毒，并研究其特异免疫原性。
方法：运用同源DNA重组技术将带有结核分泌抗原Ag85A和ESAT6的基因片段插入表达质粒pgpt ATA-18中。重组表达质粒导入牛痘病毒Ankara(MVA)后，使用MPA选择培养基挑取空斑，经Western blot鉴定后，得到5个种类的带有结核抗原基因的重组病毒单克隆。用构建的5种重组亚牛痘病毒免疫小鼠，采用MTT法检测免疫后小鼠脾淋巴细胞对特异结核抗原的增殖反应；采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠脾淋巴细胞培养上清液中IFN-γ的含量；采用结核菌素纯蛋白衍化物(PPD)皮内试验以检测重组亚牛痘病毒引发的针对结核抗原的特异细胞免疫应答。
结果: 构建的5种结核抗原重组亚牛痘病毒介导的细胞表达产物经Westernblot鉴定发现与结核抗原一致的表达条带。免疫小鼠两次后，5种重组病毒免疫组脾淋巴细胞体外与Ag85-ESAT6融合蛋白共培养后表现出明显的增殖活性，而同组细胞与生理盐水共培养后无增殖表现(P＜0.01)；与空亚牛痘病毒或生理盐水免疫后小鼠相比，5种重组MVA免疫组脾淋巴细胞与Ag85-ESAT6融合蛋白共培养后同样表现出明显的增殖活性(P＜0.01)。5种重组MVA免疫组脾细胞经Ag85-ESAT6融合蛋白刺激后的培养上清液中IFN-γ的浓度均较同组细胞经生理盐水刺激明显增高(P＜0.05)；与空亚牛痘病毒和生理盐水免疫组小鼠相比，5种重组MVA免疫组脾淋巴细胞与Ag85-ESAT6融合蛋白共培养的细胞上清液中IFN-γ的浓度均升高(P＜0.01)。与空亚牛痘病毒或生理盐水免疫后小鼠相比，5种重组MVA免疫组小鼠对PPD都表现出显著的迟发型超敏反应应答(P＜0.05)。
结论: 成功构建了5种不同类型的表达结核杆菌特异抗原的重组亚牛痘病毒疫苗，其免疫小鼠后可激发针对结核杆菌抗原的特异性细胞免疫。